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酸性染色液的原理：
某些微生物的細胞中含有長鏈脂肪酸而具有了抵抗結晶紫和其他堿性染色劑透過的保護衣。必須加熱或者使用洗滌劑，以確保初染試劑能滲入微生物內。一旦染色試劑進入細胞內，就不能被通常所用的酸性乙醇溶劑脫色，而呈現粉紅色。
酸性染色液的使用說明：
1、將涂片加熱固定，滴加染色液，徐徐加熱至蒸氣出現，但切不可使沸騰。染色如因蒸發減少時，應隨時添加。染5分鐘，傾去剩余染液，水洗。
2、滴加3%鹽酸-乙醇溶液脫色，直至無紅色脫落為止，水洗。
3、滴加呂氏堿性美藍溶液復染30秒~1分鐘，水洗，待干鏡檢。
酸性染色液的注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
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