迷你梯度PCR儀的性能對于您和您的研究具有至關重要的作用。溫度、變溫速率和保持時間是影響PCR反應成功的關鍵參數。高性能PCR儀必須能夠準確控制液體(反應)溫度和保持時間,不受反應體積的影響。PCR儀對溫度和保持時間的控制在PCR優化實驗中具有更重要的作用。PCR儀必須在正常PCR和PCR優化運行過程中提供相同的性能。梯度溫度控制是幫助用戶進行PCR優化實驗的特性之一,以便確定PCR實驗方案的溫度和保持時間,盡量減少實驗次數。在理論上,真正的梯度應在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率。
迷你梯度PCR儀實驗操作注意事項:
1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的準確度;
5.加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
6.操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,建議使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;
8.重復實驗,驗證結果,慎下結論。
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