mRNA 轉染是一種新的解決方案,適用于各種難以用質粒 DNA 轉染的細胞,包括貼壁細胞(神經元或原代細胞)和懸浮細胞(淋巴細胞)。與 DNA 轉染相比,該過程具有許多優點:轉染細胞的百分比高,轉染后蛋白質表達速度更快,與質粒或病毒載體相比,沒有插入誘變的風險。實際上,mRNA 在細胞質中傳遞和表達,不需要穿過核膜,這是質粒轉移的限制步驟之一。此外,新一代修飾的 mRNA 降低了通常由 mRNA 進入胞質溶膠誘導的毒性和免疫反應 (1, 2)。 mRNA 轉染的瞬時特性對于許多應用來說是理想的,包括細胞重編程、基因組編輯 (CRISPR/Cas9) 和疫苗。 Polyplus-transfection® 開發了一種新型 mRNA 轉染試劑 -jetMESSENGER®,其效率優于 DNA 轉染效率。
Fig1. Mechanism of transfection of jetMESSENGER
接下來小編好好給你介紹一下
1.好的轉染效率:mRNA轉染優于DNA轉染效率
Fig2.在用 jetMESSENGER® 轉染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 或用 Lipofectamine® 2000 轉染 EGFP (pCMV-EGFP) 的質粒 DNA 轉染 24 小時后,通過 FACS 分析在癌細胞系中測定轉染效率。
Fig3.轉染后 24 小時,通過熒光顯微鏡在 Hep G2 細胞中測定 GFP 表達。 在使用jetMESSENGER® 轉染期間保持細胞形態。
jetMESSENGER® 優于競爭對手的DNA和mRNA轉染產品:
Fig4.在用 jetMESSENGER® 或 Lipofectamine® MessengerMax™ 轉染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 24 小時后,通過 FACS 分析在懸浮細胞中測定轉染效率。
2.對多種難轉染細胞有效:適用于緩慢分裂的處于靜止期的原代細胞/干細胞
Fig5.在用 jetMESSENGER® 轉染 mRNA 后,通過熒光顯微鏡在各種細胞系中測定 GFP 表達
3.對細胞極其溫和:維持良好的細胞活率
Fig6.a.在用 jetMESSENGER® 轉染 EGFP mRNA (L-6101, Trilink™) 或用 Lipofectamine® 3000 轉染 EGFP (pCMV-EGFP) 的質粒 DNA 后 24 小時或 48 小時,通過 FACS 在人星形膠質細胞中分析 GFP 表達。b.在用 jetMESSENGER® 或 Lipofectamine® MessengerMaxTM 轉染 EGFP mRNA(L-6101,Trilink™)后 24 小時、48 小時、72 小時或 96 小時,通過 FACS 在人成纖維細胞中分析 GFP 表達。
Fig7.通過熒光顯微鏡在各種來源的人類癌細胞、MDA-MB-231(乳腺細胞)和 SW1353(人類骨成纖維細胞)中測定 GFP 表達。
4.適合眾多應用:可用于基因表達,CRISPR基因編輯,iPS誘導和其他應用
接著我們來看看-jetMessenger在神經元轉染上的具體應用
為了提高功能和生化分析等不同應用的轉染效率,在不同類型的神經元和神經膠質細胞中轉染了 eGFP mRNA。 如Fig8所示,獲得了高于40% 的海馬和皮質大鼠原代神經元的高轉染率。 此外,從 iPS 細胞獲得的多巴神經元實現了高轉染效率,結果表明jetMESSENGER® 是研究重編程和分化的非常強大的工具。 對于人類正常的星形膠質細胞,獲得了幾乎 100% 的轉染效率(Fig.8)。
Fig8. 使用 jetMESSENGER® 轉染不同類型的神經元。 (A) 用 jetMESSENGER® 轉染編碼 eGFP (EGFP-mRNA) 的 mRNA,并通過熒光顯微鏡評估轉染后 4 小時的 eGFP 表達。 (B) 星形膠質細胞轉染后 24 小時通過流式細胞儀分析評估轉染效率。 對于皮質、海馬和多巴神經元,使用熒光細胞成像儀進行熒光顯微鏡分析。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
jetMESSENGER® | 101000056 | 0.1 mL |
jetMESSENGER® | 101000005 | 0.75 mL |
上海優寧維生物科技股份有限公司
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