細胞外囊泡 (extracellular visicles，EV) 是由細胞釋放出的攜帶并保護細胞來源生物信息分子物質的特殊結構，可通過轉運核酸和蛋白質等生物信息物質參與體內靶細胞的信號調節，并作為藥物或疫苗的載體在抗腫瘤治療、干細胞治療等領域發揮關鍵作用，而其中EV中的RNA分子 (exoRNA) 因其*的表達模式而受到了廣泛的關注。

一、外泌體及miRNA純化

① 外泌體純化
沉淀法miRCURY®外泌體純化試劑盒 暢銷
※ 從不同起始材料中進行外泌體提取：尿液樣本2-10 mL，CSF樣本1 mL，細胞培養液 1-10 mL ；血漿/血清0.2-1.4mL
※ 2小時內完成外泌體提取
※ 無需高速離心及酚/氯仿提取
※ 適用于多種應用，如miRNA或RNA profiling

訂購信息

親和柱膜法外泌體分離及外泌體內RNA(含miRNA)的純化
exoEasy Maxi Kit  貨號：76064
從血漿、血清、細胞培養上清及其他生物液體中分離完整的exosome及其他細胞外囊泡

※ 適用于囊泡功能性檢測及物理和生化分析
※ 可在25分鐘內純化獲得exosome及其他細胞外囊泡
※ 離心柱純化流程，可平行處理多個樣品
※ 可處理大體積的樣品(4 ml血漿或血清，或32ml細胞培養上清)，靈敏檢測低豐度轉錄本

exoRNeasy Serum/Plasma Kit  暢銷
采用親和性膜離心柱，可從來自血清、血漿、尿液、細胞上清等樣本中分離exosome和其他細胞外微泡中高效分離RNA。該試劑盒能夠快速、便利的獲得結果，十分適用于敏感的下游應用。

訂購信息

特殊樣本外泌體及miRNA純化試劑盒訂購指南

② miRNA純化：Copurifcation of miRNA and total RNA 
產品特點：
※ 可以單獨富集各種組織、細胞樣品中的miRNA和其他小RNAs (＞18nt)，做芯片分析時單獨分離可能會有幫助 
※ 推薦同步純化包含miRNA的總RNA，這樣有助于一次cDNA合成可以獲得所有類型RNA信息，便于同時進行miRNA，mRNA或其他非編碼RNA檢測
※ 硅膠膜技術確保獲得最好純度miRNA，不會有Trizol方法帶來的選擇性miRNA丟失，適合各種下游檢測

miRNeasy Serum/Plasma Kit (貨號：217184)
※ 同樣使用經典的硅膠膜法
※ 該試劑盒適用于使用檸檬酸鹽或EDTA抗凝的血清 (不能使用肝素，會干擾下游的實驗)
※ 保證清洗緩沖液的溫度在20-30°C，否則會有鹽類的殘留
※ 配合使用Spick-in control，對純化效率及下游檢測進行監測

miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit (貨號：217204) 暢銷
※ 無需Phenol裂解，更易于在QIAcube進行自動化操作
※ 采用UCP MinElute純化柱，更安全、更小洗脫體積
※ 純化高品質含胞外/外泌體非編碼RNA(miRNA)的總RNA，適合任何下游應用

miRNA純化試劑盒訂購指南

二、miRNA定量

① miRCURY LNA miRNA qPCR檢測系統

Exiqon microRNA qPCR系統將通用逆轉錄的高靈敏度，高效率與鎖核酸修飾的定量引物的高特異性相結合，在3個小時之內即可完成microRNA表達分析。miRCURY LNA miRNA qPCR系統可提供assays及panels規格，20ng total RNA無需預擴增即可在96孔及384孔板上進行上百microRNAs的精準定量。miRCURY LNA miRNA qPCR檢測系統具有以下特點：
● 高的靈敏度：低至1pg total RNA即可進行可靠的定量
● 高的特異性：LNA引物可精確區分只有一個堿基差異的miRNA異構體
● 實驗操作簡單方便：在3小時內即可完成從樣本到數據分析的整個流程

miRCURY LNA RT kit （貨號：339340）
用于一鏈合成，與miRCURY LNA miRNA PCR Assays / Panels搭配使用效果佳，包含RNA spike-in模板。

miRCURY LNA miRNA PCR Assay / Custom PCR Assay / miRCURY LNA miRNA PCR Panels
200次反應的預制或定制LNA miRNA PCR primers，用于目標miRNA表達水平檢測。

miRCURY LNA SYBR Green PCR Kits（貨號：339345、339346、339347）
用于qPCR檢測，包含ROX染料。

miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit（貨號：339320） 爆品
包含該套件包括UniSp6模板及引物，一個候選內源對照引物組（miR-103a-3p）和兩個經過驗證的引物組（人、大鼠、小鼠），并通過LNA技術進行了增強。這些試劑能夠定量分析多達20個樣品。

訂購信息

圖1：PolyA尾添加到成熟的miRNA模板中（步驟1A）。使用帶有3' degenerate anchor及5' universal tag的PolyT primer進行cDNA合成（步驟1B）。用一對microRNA特異性LNA primer對cDNA進行擴增（步驟2A），使用SYBR® Green或probe進行檢測（步驟2B）。

圖2：低至1pg total RNA 即可進行精準定量。人 AM6000 total RNA梯度稀釋后進行定量，所有的microRNA assay均顯示出線性相關R2＞0.99。

② 愛必信miRNA定量分析系列產品
miRNA加尾法和探針法逆轉錄試劑盒產品特點：
● 基因工程優化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速；
● 特別設計的含Oligo d(T)的引物，能夠與miRNA Poly A+高效結合，RT效率高于多家同類試劑；
● 一次逆轉錄可獲得多個miRNA的RT產物，后續可進行多個miRNA的檢測，極大節省樣本用量；
● 可配套 miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑或者iRNA探針法熒光定量PCR試劑使用，輕松獲得優化的實驗結果并可免費獲得配套的下游引物。

miRNA莖環法逆轉錄試劑盒產品特點：
● 高效的基因工程優化的逆轉錄酶，可大幅提升miRNA RT反應的效率；
● 特別設計的莖環引物可高效、特異性地反轉錄目的miRNA，獲得加長的miRNA cDNA，不僅可用于染料法qPCR, 也可用于探針法qPCR；
● 搭配 miRNA莖環染料法熒光定量PCR試劑盒，可獲得優化的實驗結果并可免費獲得莖環引物和上下游引物的設計和序列信息。

miRNA系列產品

三、高通量miRNA定量及篩選

① miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel：集成式篩選多個miRNA 的表達
產品特點：
• 即用型 miRNA PCR panel 專注于特定應用、樣本類型或疾病  
• 快速且易于使用，無需預放大
• 高重現性和最小技術變化的簡單協議
• 可靠區分密切相關的 miRNA 以及成熟和前體 miRNA

miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel快速索引

訂購信息

四、microRNA功能研究工具

① miRNA Mimic
 miRNA mimic被設計用來模擬自然發生的、成熟的miRNA。將miRNA模擬物引入細胞將增加含有該特定miRNA的RNA誘導沉默復合物(RISC)的比例。通過研究這種miRNA活性增加的表型后果，有可能發現miRNA的功能。

（1）LNA修飾mimic
訂購信息：

(2)miRIDIAN mimic
訂購信息：

② miRNA Inhibitors and Power Inhibitors
miRNA Inhibitors 是一種反義寡核苷酸，具有與其靶點互補的完整序列。當被導入細胞時，它們將目標miRNA隔離在高度穩定的異源雙鏈體中，有效防止miRNA與其正常細胞相互作用。有三種不同類型的miRNA Inhibitors可供選擇。

(1)LNA修飾inhibitor
訂購信息：

對于每種抑制劑，我們提供以下兩種對照：
陰性對照A：在NCBI和miRBase數據庫中，與任何生物中的任何序列的同源性均不超過70％
陰性對照B：在NCBI和miRBase數據庫中，與任何人類，小鼠或大鼠序列的同源性均不超過70％。不建議在植物中使用

(2)miRIDIAN inhibitor
訂購信息：

③ miRNA Target Site Blockers
利用靶位點阻斷劑（Target Site Blockers）發揮miRNA的功能，miRNA通常會調節多個靶標的基因表達，并且抑制miRNA會導致所有這些靶標的抑制。因此，miRNA抑制后觀察到的表型是幾個靶標阻遏作用的綜合結果。然而，放松對這些靶標中的一些靶標通常會顯著地影響表型。識別這些靶標對于理解miRNA的功能至關重要。靶位點阻斷劑使研究人員能夠研究miRNA對單個靶標的作用。

使用靶標封閉劑研究 microRNA 的目標區域，從分子角度更有針對性的研究 microRNA 功能。單個目標對所獲得的表型的作用可以通過目標位點阻斷劑(TSB)進行研究，特異性地阻止了microRNA與其中一個RNA靶點的相互作用。

產品特征：
• 定制設計的目標位點阻斷劑，用于特異性抑制 miRNA 目標
• 精巧的設計和優秀的高親和力，無論目標序列如何
• 優秀的體外和體內功效
• 由于缺乏依賴于 RNase H 的 mRNA 降解，優秀的性能和高蛋白表達
• 在非常低的濃度下有效，在目標位點上勝過 miRNA
• 具有持久反義活性的優秀生物穩定性     

訂購信息：

五、LNA檢測探針--NB及原位雜交
① LNA檢測探針 — Northern Blotting及原位雜交
針對mRNA、lncRNA或miRNA的定位檢測，Exiqon可提供LNA檢測探針，序列特異性強，靈敏度高、探針標記方式靈活多樣，尤其適合用于Northern Blotting和原位雜交實驗，可滿足研究者的不同實驗需求。

LNA鎖核酸探針核心優勢
● 優秀的靈敏性和特異性
● 可檢測所有已知的mRNA、lncRNA、microRNA，并可支持定制
● Tm均一化探針可實現ISH multiplexing及自動化
● 可提供無標記，預置標記及訂制標記形式的探針
● 與放射性及非放射性方法兼容
● 適用于多種樣本類型

LNA探針已經成功的使用在多種樣本類型中（見圖1），包括整體樣本（whole-mount），單細胞，冷凍切片及FFPE組織樣本等。對于FFPE樣本，我們推薦使用miRCURYLNA microRNA ISH Optimization Kits進行優化來調整自己探針的最佳使用量和試劑配比，從而確保自身探針實驗的成功。

圖1：LNA探針已經成功的使用在多種樣本類型中

訂購信息

六、miRNA 相關轉染
① 基于脂質分子的轉染試劑--HiPerFect Transfection Reagent （貨號：301705）
● 低至 10 pM siRNA的高效轉染
● 實現低濃度siRNA的使用，最大限度減少脫靶效應
● 多種貼壁和懸浮細胞，以及原代細胞系已經利用 HiPerFect Transfection Reagent成功轉染（精選細胞系詳見表1）。
● siRNA 的轉染可能引起脫靶效應，產生非特異性的RNAi實驗結果。使用低濃度的siRNA，可大大降低脫靶效應。有了HiPerFect Transfection Reagent，低至10 pM siRNA也能觀察到高效的轉染和沉默，讓等量的siRNA可用于更多實驗（圖1）。

表1 成功轉染的細胞系

圖1. 皮摩爾siRNA的高效轉染。利用HiPerFect Transfection Reagent (3μl),在24孔板中用各種量的CDC2 siRNA和非沉默對照siRNA（對照）轉染HeLaS3細胞。48小時后，通過實時定RT-PCR分析CDC2的表達。

② PEI陽離子聚合物轉染試劑-- INTERFERin® （貨號：101000036、101000028）更少的siRNA，更高的沉默效率，降低脫靶效應！
● 高效基因沉默效率：在多種細胞中達到超過90%的基因沉默
● 極低的脫靶效應：使用低至1nM siRNA
● 溫和的轉染模式：保持優秀的細胞活率
● 操作簡單：兼容血清和抗生素

圖注：根據標準操作手冊在穩定表達熒光素酶的3LL細胞中進行轉染

圖注：根據標準操作手冊在CaSKi細胞中進行轉染

③ 活體轉染方案---in vivo-jetPEI®（貨號：101000040、101000030）
注射型轉染試劑，用于基因治療和疫苗！

in vivo-jetPEI®的優勢：
● 使用便捷：兩步操作
● 給藥方便：可用于各種注射途徑，以達目標
● 量身定制：專家優化的操作方案

in vivo-jetPEI®的介紹：
● 適用于任何動物模型的DNAsi/sh/miRNA活體轉染
● 享有盛名：*的活體轉染技術，引用文獻超過700篇
● 成功的產物：從基礎研究到人臨床研究（提供GMP級產品）

圖注：使用in vivo-jetPEI®在動物模型上的各種給藥途徑

七、miRNA文庫構建

① QIAseq miRNA Library Kit（貨號：331502、331505）
基于分子條形碼技術的高精度特異性小RNA快速測序文庫構建文案
● 采用分子條形碼（UMI）技術用于擴增偏倚的去除
● 僅需1ng總RNA，可僅依靠試劑盒內含的磁珠進行純化而無需切膠回收
● 可用于miRNA，piRNA等Small RNA的表達分析以及全新Small RNA的發現
● 基于qPCR的*miRNA QC系統及外源參照，可用于樣本質量以及測序后NGS線性度和可重復性的評估

圖注：“gel-free”小RNA快速文庫構建流程

訂購信息