世界醫(yī)藥品銷售額排行中位于前百的產(chǎn)品中，生物藥占據(jù)了50%，而抗體藥更是在銷售額排行的前20種藥品中占了9種。近年來，醫(yī)藥界正在研發(fā)小分子抗體，這種抗體不但保持了抗體的高度特異性，其分子量還小于完整的抗體。小分子抗體有許多種類，除了抗體片段（Fab）以外，在利用基因工程技術(shù)制備的人工抗體中，還有單鏈抗體（scFv）、串聯(lián)單鏈抗體（tandem scFv）、更為單純的雙鏈抗體(diabody)等。

這些小分子抗體不含有Fc片段，所以無法用Protein A填料進(jìn)行親和純化。因此，使用與Fab片段的Kappa輕鏈（kappa Light chain）結(jié)合的Protein L填料，能夠有效進(jìn)行親和純化。TOYOPEARL AF-rProtein L-650F具有抗體吸附載量高，耐堿性優(yōu)異的特點(diǎn)。可用0.1 mol/L NaOH溶液清洗，所以與傳統(tǒng)的Protein L填料相比，更有利于提高生產(chǎn)能力和降低生產(chǎn)成本。

● 高載量型TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的產(chǎn)品特性

● TOYOPEARL AF-rProtein L-650F的優(yōu)勢

?高吸附載量 ：是市售Protein L填料載量的約1.5倍

?提高耐堿性 ：可用0.1 mol/L NaOH清洗，可重復(fù)使用

?低配體脫落量 ：Protein L配基為多點(diǎn)結(jié)合，填料配基脫落率較低

?高速分離、處理 ：填料骨架剛性強(qiáng)，所以可用大口徑柱進(jìn)行高流速分離（駐留時間約為2-3分鐘）

?提高生產(chǎn)能力 ：高載量、耐堿性，可在生產(chǎn)中降低填料的成本

?穩(wěn)定提供 ：可確保穩(wěn)定提供超過10 L的大量填料

?篩選用預(yù)裝柱 ：提供1 mL和5 mL預(yù)裝柱，用于工藝開發(fā)

● 使用Protein L填料純化抗體分離單鏈抗體（scFv）和tandem scFv的分離條件舉例：

吸附溶液：0.02-0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液 (pH 6.5)

淋洗：

scFv、tandem scFv（CHO細(xì)胞培養(yǎng)液）：含有0.25-1 mol/L精氨酸和5-10 %異丙醇的吸附溶液

scFv（大腸桿菌的包涵體）：含有2 mol/L鹽酸胍的吸附溶液*

洗脫：0.1 mol/L 檸檬酸或甘氨酸/HCl (pH 2.0-pH 3.0)

清洗：酸性溶液 pH 2.0-pH 2.2

CIP：   0.05–0.1 mol/L NaOH，接觸時間為10–15分鐘（限定使用濃度不超過0.1 mol/L NaOH水溶液）

（用0.1 mol/L NaOH水溶液浸泡9小時后，吸附量仍維持 90 %）

10–20 %乙醇和異丙醇也可有效去除疏水性雜質(zhì)

* Reference：Tosoh Bioscience LLC Application Note, Capture of a scFv from E.coli using TOYOPEARL^® AF-rProtein L-650F

● 使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F純化 CHO細(xì)胞培養(yǎng)液中tandem scFv抗體，對其吸附載量和淋洗的效果

Buffer; 0.1 mol/L sodium citrate buffer (pH 6.5)  LOD; Limit of detection

Column size; 1 mL

※使用添加精氨酸（Arg）和異丙醇（iPrOH）的溶液進(jìn)行淋洗，有效去除了HCP、DNA等雜質(zhì)。

● Protein L純化后的層析步驟

在Protein L填料純化后的下一個步驟中使用以下其他模式的填料，能夠進(jìn)一步有效去除雜質(zhì)。

?離子交換填料 ：TOYOPEARL NH2-750F、Sulfate-650F（耐鹽性離子交換填料）

?疏水填料 ：TOYOPEARL PPG-600M、Phenyl-600/650M、Butyl-600/650M、Hexyl-650C

?混合模式填料 ：TOYOPEARL MX-Trp-650M

● Protein L填料和篩選用預(yù)裝柱產(chǎn)品一覽表

※ 如需購買Protein L填料的配基脫落檢測套裝，請咨詢我公司銷售人員或代理。

※ 純化完整的抗體，請使用高載量、耐堿型的TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F填料 。