分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放單細胞培養物(原代細胞培養物)或收集已培養的細胞將其轉移到新的培養基質上(傳代培養)。
分散酶II可應用于組織的解離,具體步驟如下:
1、用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊。
2、用無菌PBS清洗組織塊。
3、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml),并確保組織塊全部浸沒于Dispase溶液中。
4、37°C孵育,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。(若*一次使用該酶,可通過細胞計數來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織,1h即可達到分離目的,但更長時間(如數小時)的孵育也不會明顯影響細胞活性。)
5、如有需要,可將上述消化產物通過無菌不銹鋼網篩過濾,以分開單細胞與殘留的組織塊。或者待大塊組織沉淀后輕輕倒出上層細胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。
6、離心沉淀細胞,倒掉酶溶液;
7、用培養基重懸細胞沉淀,并于常規條件下培養細胞。
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