乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒的使用方法與應(yīng)用！

一、背景

乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒是用于大腸菌群，糞大腸菌群，大腸桿菌的測(cè)定（GB標(biāo)準(zhǔn)）的固體顆粒培養(yǎng)基。乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基顆粒用溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色，大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，因此乳糖膽鹽發(fā)酵管里溶液顏色變成黃色和產(chǎn)生氣泡。膽鹽的作用：膽鹽對(duì)很多雜菌有抑制作用，但是對(duì)大腸桿菌不造成影響。成分（g/L）蛋白胨20.0g；牛膽鹽5.0g；乳糖10.0g；溴甲酚紫0.01g，PH值7.4±0.2。

二、檢驗(yàn)原理

蛋白胨提供碳源和氮源滿足細(xì)菌生長(zhǎng)的需求；牛膽鹽可抑制革蘭氏陽性細(xì)菌的生長(zhǎng)；乳糖是大腸菌群可發(fā)酵的糖類；溴甲酚紫是pH指示劑，酸性呈黃色，堿性呈紫色。

三、使用方法

1、稱取本品35克(單料)或70克(雙料)加入蒸餾水或去離子水1L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝于帶有小倒管的試管中，培養(yǎng)基每管10mL，115℃高壓滅菌15min。

2、樣品的處理及稀釋。

3、(1)食品：取1mL稀釋液，加入到含有10mL乳糖膽鹽培養(yǎng)基的試管中，根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選取三個(gè)合適的稀釋度每個(gè)稀釋度接種三管。將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。(2)一次性使用衛(wèi)生用品：取樣液5mL接種50mL單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。

4、將試管放入到培養(yǎng)箱中36±1℃培養(yǎng)24h。

5、觀察結(jié)果。如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則要進(jìn)行分離、證實(shí)試驗(yàn)。

四、應(yīng)用

用于乳品中大腸菌群快速檢測(cè)研究：

以國標(biāo)法中乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為基本營養(yǎng)成分,分別研究構(gòu)建了檢測(cè)片法和細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法,并對(duì)模擬條件下的可逆性損傷大腸桿菌進(jìn)行了復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)研究。為探索適合乳品中大腸菌群快速檢測(cè)的方法和提高檢出率打下研究基礎(chǔ)。

研究了一種用于快速檢測(cè)大腸菌群的細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法,即以國標(biāo)法中的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為營養(yǎng)成分,經(jīng)濃縮、干燥后制成快速檢測(cè)瓶劑,以遴選的3.5 mol/LNaOH配制的百里香酚酞溶液作為產(chǎn)氣指示劑,并將其制成1×1cm規(guī)格產(chǎn)氣指示試紙。

樣品滴加細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),培養(yǎng)24 h,依據(jù)培養(yǎng)瓶蓋上產(chǎn)氣指示試紙顏色變化及瓶?jī)?nèi)溶液顏色變化,確定可疑陽性樣品,并對(duì)其進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)及鏡檢,驗(yàn)證大腸菌群的存在性。實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶法進(jìn)行了大腸菌群的重復(fù)性及實(shí)際樣品檢測(cè),并與國標(biāo)法進(jìn)行了比較。

結(jié)果顯示,細(xì)胞培養(yǎng)瓶法與國標(biāo)法所測(cè)結(jié)果符合率達(dá)96%,樣品檢測(cè)報(bào)告時(shí)間只需24 h,兩種方法所測(cè)結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05)。細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法表現(xiàn)出明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì),利于基層監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)企業(yè)對(duì)食品中大腸菌群的快速檢測(cè)。

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