液相色譜柱放了很長(zhǎng)時(shí)間即使密封良好,柱內(nèi)的流動(dòng)相還是會(huì)揮發(fā)掉一些。這時(shí)如果流動(dòng)相流速上升得很快,就極易將色譜柱的柱床破壞,那怎么辦呢?
合理的操作是,一開始流動(dòng)相用較小的流速0.1~0.2mL/mn(對(duì)4.6mm內(nèi)徑的標(biāo)準(zhǔn)分析柱),仔細(xì)觀察色譜柱出口(先不接管路)流動(dòng)相流出的情況以及柱壓的變化。如果色譜柱沒全部干,很快會(huì)有帶氣泡的流動(dòng)相流出,等流出流動(dòng)相中沒有氣泡,壓力上升后,可逐步提高流速,使流動(dòng)相充分浸潤(rùn)柱床。
如果柱子里流動(dòng)相基本干了一年以上,如果溶劑揮發(fā)性強(qiáng),密封不好,時(shí)間可能更短),最好用更低的流速,讓流動(dòng)相緩慢通過(guò)色譜柱,并將氣泡排除,這至少需幾個(gè)小時(shí),有條件的沖洗幾天,也可放置幾天使流動(dòng)相充分浸潤(rùn)色譜柱的柱,切不可操之過(guò)急。
作為HPLC分析人員,當(dāng)色譜柱拆下不用時(shí),一定要把堵頭擰緊,使色譜柱兩頭密封。還應(yīng)當(dāng)注意定期檢査長(zhǎng)期不用的色譜柱,避免讓柱床干了。
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