培養(yǎng)基瓊脂粉一般為白色、淡黃色或淡灰色粉末狀,在冷水中不溶解,加熱煮沸或高壓滅菌可使瓊脂溶解,冷卻后可凝成固態(tài),反復(fù)加熱和冷卻雖然可以使瓊脂在液態(tài)和固態(tài)多次轉(zhuǎn)換,但瓊脂的凝膠強(qiáng)度會(huì)越來越低。外觀白而沒有光澤,雜質(zhì)含量高,透明度很差(濃度的水溶液溶解后,可發(fā)現(xiàn)大量的水中不溶物)。如果用冷水或溫水浸泡30分鐘左右,它很快就吸水膨脹復(fù)原,而真瓊脂沒有這種現(xiàn)象。
培養(yǎng)基瓊脂粉的使用注意事項(xiàng):
1、溶解干粉時(shí),建議水溫在40℃以下,最高不超過60℃。瓊脂在遇到熱水時(shí),表面易吸水變硬,結(jié)成硬塊,不利于分散溶解。因此在進(jìn)行干粉溶解時(shí),宜用冷水,并不停攪拌至分散均勻無團(tuán)塊,再進(jìn)行加熱處理;
2、滅菌前需進(jìn)行加熱煮沸使瓊脂*溶解,分散均勻,方可進(jìn)行分裝試管或錐形瓶,否則分裝后可能出現(xiàn)瓊脂分布不均,凝固性不一;滅菌前的加熱煮沸溶解同時(shí)有助于加快高壓滅菌過程的熱穿透,提高滅菌效果,降低滅菌失敗的幾率;
3、已凝固的培養(yǎng)基不可以再次高溫高壓滅菌。若培養(yǎng)基內(nèi)成分較穩(wěn)定,可重新沸水浴溶化一次使用;
4、需添加抗生素或其他不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基,需在臨用前,待培養(yǎng)基冷卻至50-55℃時(shí)加入,過早或過熱時(shí)加入這些成分,易導(dǎo)致不穩(wěn)定成分分解,降低培養(yǎng)基使用效果;
5、已凝固的培養(yǎng)基不可反復(fù)多次加熱溶化使用。反復(fù)加熱易使培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)成分分解,瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降,一般成分較穩(wěn)定的培養(yǎng)基允許溶化一次使用。
6、已凝固的培養(yǎng)基,不可在結(jié)冰條件下保存。培養(yǎng)基結(jié)冰會(huì)使瓊脂內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞,導(dǎo)致失水或凝固性變差,瓊脂變性。
培養(yǎng)基瓊脂粉不凝固的因素:
1、培養(yǎng)基PH值過低,偏酸,水解。
2、所加瓊脂量不夠,增加用量。攪拌不均勻,倒板前沒有充分搖勻,凝固不均勻。
3、瓊脂質(zhì)量不過關(guān),瓊脂條在使用時(shí)添加量要稍微高一點(diǎn),瓊脂粉是不是新買的。
4、滅菌溫度過高,加熱時(shí)間過長。PH改變或破壞了瓊脂的凝固度。
5、培養(yǎng)基沒有加熱溶解夠不夠,就沒有凝固。是不是瓊脂加錯(cuò)了,營養(yǎng)瓊脂不會(huì)凝固。
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