前言：提高在實(shí)驗(yàn)室中執(zhí)行常規(guī)測(cè)量的分析系統(tǒng)通量，可節(jié)省時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。但是，提高通 量不得影響分析準(zhǔn)確度或精密度。考慮使用紫外-可見分光光度計(jì)的效率時(shí)，如果手 動(dòng)填充、取放和清潔比色皿，樣品處理通常是主要的限速步驟。 本研究對(duì)蠕動(dòng)泵（用于將液體樣品泵送通過(guò)分光光度計(jì)中的流通池）的使用與手動(dòng) 測(cè)量進(jìn)行了比較。附件 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵可通過(guò)分光光度計(jì)的軟件進(jìn)行控制，從而 集成為分析方法的一部分。 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵的*之處在于有三個(gè)通道，可將三個(gè)液體樣品同步泵入紫外-可 見分光光度計(jì)中。它能配合 Cary 3500 紫外-可見分光光度計(jì)的同步測(cè)量功能， 從而增強(qiáng)了樣品自動(dòng)化處理的明顯優(yōu)勢(shì)。 使用常見的分析應(yīng)用，即市售泡騰片中維生素 C（L-抗壞血酸）的定量分析，進(jìn)行了 兩種方法的比較研究。

實(shí)驗(yàn)部分：標(biāo)樣前處理L-抗壞血酸儲(chǔ)備液配制：在 23.5 °C 下將 50.0 mg 純 L-抗壞血 酸溶于 100 mL 0.1 mol/L HCl 中，得到 pH 為 1.5 的 500 mg/L 儲(chǔ)備液。然后用 0.1 mol/L HCl 稀釋儲(chǔ)備液，制得濃度在 0–70 mg/L 之間的八種標(biāo)樣，如表 1 所示。這些標(biāo)樣涵蓋約 0–4 個(gè)吸光度單位的吸光度范圍，該范圍代表了常規(guī)掃描紫 外-可見分光光度計(jì)的典型范圍。所有測(cè)量（使用和不用 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵）采用相同的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品前處理 市售泡騰維生素 C 片購(gòu)自當(dāng)?shù)厮幏俊?biāo)簽表明，每片含 1000 mg 維生素 C。記錄 20 片中每片的重量（表 2），然后用研缽 和研杵碾成粉末。對(duì)于每個(gè)樣品，取 5.5–28.0 mg 之間的不 同量粉末。將粉末溶于 100 mL 經(jīng) Milli-Q 過(guò)濾的水中，并在 23.5 °C 下將其 pH 調(diào)節(jié)至 1.5。由此制得 20 個(gè)樣品，校準(zhǔn)范 圍為 0–70 mg/L。所有測(cè)量（使用和不用 Cary Sipper 蠕動(dòng) 泵）采用相同的樣品溶液。 假設(shè)每片包含 1000 mg 維生素 C，按照產(chǎn)品標(biāo)簽，計(jì)算每種 樣品溶液中的維生素 C 含量。該計(jì)算基于每片的重量和制備 各種樣品溶液的研磨片劑粉末所用的重量。還計(jì)算了各種樣品 溶液的最終濃度。兩種計(jì)算值列于表 2 中。

儀器 本研究采用 Agilent Cary 3500 多池紫外-可見分光光度計(jì)。 Cary 3500 儀器的這一配置最多可同時(shí)測(cè)量八個(gè)比色皿位置 （七個(gè)樣品和一個(gè)參比）。對(duì)于其中一半的測(cè)量，儀器配備 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵（參見圖 1），該蠕動(dòng)泵可同步泵送三種樣 品溶液通過(guò)位于儀器樣品室內(nèi)部的三個(gè)流通池。在另一半測(cè)量 中，手動(dòng)轉(zhuǎn)移至比色皿中，然后轉(zhuǎn)移至分光光度計(jì)中。

將蠕動(dòng)泵入口管插入包含待分析溶液的 15 mL Falcon 管中，進(jìn) 行蠕動(dòng)泵測(cè)量。然后將溶液泵入單個(gè) 10 mm 光程的 390 µL 石 英流通池中。在兩次掃描之間，使用 Milli-Q 水沖洗流動(dòng)池， 以免交叉污染。將每個(gè)標(biāo)樣和樣品重復(fù)測(cè)量三次。 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵在 80 rpm 的固定轉(zhuǎn)速下運(yùn)行。在測(cè)量之前 將溶液泵送到流通池中所需的時(shí)間稱為“填充”時(shí)間。隨后的 無(wú)泵送時(shí)間段（使溶液靜置去除氣泡及顆粒干擾）稱為“保 持”時(shí)間。最后設(shè)定蠕動(dòng)泵將沖洗溶液泵送通過(guò)流通池的持續(xù) 時(shí)間，稱為“沖洗”時(shí)間。所有這三個(gè)時(shí)間均在 Cary UV 工作 站軟件中進(jìn)行設(shè)置，并可以另存為已存儲(chǔ)方法的一部分。對(duì)于另一半測(cè)量，使用標(biāo)準(zhǔn) 10 mm 光程的 3.5 mL 石英比 色皿。每次測(cè)量后，用樣品溶液手動(dòng)填充這些比色皿，并用 Milli-Q 水進(jìn)行沖洗。將每個(gè)標(biāo)樣和樣品重復(fù)測(cè)量三次。 在兩種儀器設(shè)置下，使用相同的標(biāo)樣和樣品溶液，以便直接比 較結(jié)果。 使用 Cary UV 工作站軟件中的“濃度”應(yīng)用程序進(jìn)行測(cè)量。該 應(yīng)用程序提供了一種創(chuàng)建校準(zhǔn)曲線并基于校準(zhǔn)曲線確定樣品濃 度的方法。 每個(gè)標(biāo)樣和樣品的波長(zhǎng)掃描（使用表 3 中列出的參數(shù)）在 350–200 nm 之間進(jìn)行。樣品經(jīng)過(guò) 0.1 mol/L HCl 的基線校 正。利用 243 nm 下的峰進(jìn)行定量分析。然后利用各種標(biāo)樣的 吸光度值創(chuàng)建校準(zhǔn)曲線。使用相同的儀器參數(shù)測(cè)量樣品，并對(duì) 每個(gè)樣品中的維生素 C 含量進(jìn)行定量分析。

2. 不用蠕動(dòng)泵，使用三個(gè)標(biāo)準(zhǔn) 3.5 mL 比色皿。每次測(cè)量時(shí) 手動(dòng)填充、清空和沖洗比色皿。使用 Cary 3500 多池儀器 的同步測(cè)量功能，同步測(cè)量所有三個(gè)比色皿 3. 用蠕動(dòng)泵泵送至單個(gè)流通池 4. 用蠕動(dòng)泵泵送至三個(gè)流通池 使用表 4 所示的儀器參數(shù)進(jìn)行測(cè)量。

結(jié)果與討論 校準(zhǔn)線性 使用 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵由八個(gè)標(biāo)樣生成校準(zhǔn)曲線的 R2 值為 0.9997，而通過(guò)比色皿測(cè)量生成曲線的 R2 值為 0.9998。Cary 3500 具有超過(guò) 3 Abs 的優(yōu)異光度測(cè)量線性，能夠測(cè)量高濃度 液體樣品并獲得準(zhǔn)確的光度測(cè)量結(jié)果。

測(cè)量精度 在兩種儀器設(shè)置下，對(duì) 20 個(gè)樣品溶液分別測(cè)量 3 次。使用 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵時(shí)，將樣品溶液泵入流通池中，進(jìn)行測(cè)量， 然后替換為沖洗溶液，最后再次用相同的樣品溶液填充流通 池。對(duì)于 20 個(gè)樣品中的每個(gè)樣品，將該過(guò)程重復(fù) 3 次。使用 3.5 mL 比色皿時(shí)，用樣品填充比色皿，進(jìn)行測(cè)量，沖洗，然 后用另一份相同的樣品重新填充。對(duì)于 20 個(gè)樣品中的每個(gè)樣 品，將該過(guò)程重復(fù) 3 次。 如表 5 所示，兩組結(jié)果均具有很高的精密度，%RSD 值遠(yuǎn)低于 藥典方法中通常規(guī)定 2% 的要求。所有六次測(cè)量結(jié)果的 %RSD 為 0.1869%。

樣品定量分析 根據(jù)比爾-朗伯定律，用每個(gè)樣品三個(gè)吸光度讀數(shù)的平均值 和校準(zhǔn)曲線確定每個(gè)樣品溶液中維生素 C 的濃度。然后利用 該濃度計(jì)算所測(cè)量的各片中維生素 C 的重量。結(jié)果如表 6 所 示。使用蠕動(dòng)泵設(shè)置計(jì)算出的重量與標(biāo)示重量之間的平均偏差 為 1.8%，偏差范圍為 0.5%–5.3%。使用比色皿測(cè)得的相同 20 個(gè)樣品的平均偏差為 1.9%，偏差范圍為 0.6%–5.6%。結(jié)果完 全符合 USP 中規(guī)定的 ±10% 可接受標(biāo)準(zhǔn)[1]，表明該片劑符合其 標(biāo)簽要求。

測(cè)量時(shí)間 與手動(dòng)填充比色皿相比，Cary Sipper 蠕動(dòng)泵可節(jié)省大量時(shí)間。 如表 7 所示，與使用單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)比色皿逐個(gè)測(cè)量樣品相比，使用 帶 3 個(gè)流通池的蠕動(dòng)泵將測(cè)量 30 個(gè)樣品的時(shí)間縮短了 65%。 在不使用蠕動(dòng)泵的情況下，與對(duì)單個(gè)比色皿進(jìn)行三次填充、 排空和重新填充相比，同時(shí)測(cè)量三個(gè)比色皿可節(jié)省 24% 的時(shí) 間。與在 Cary 3500 多池儀器中同時(shí)手動(dòng)使用三個(gè)比色皿相 比，使用蠕動(dòng)泵與三個(gè)流通池可以使測(cè)量速度加快 54%。

結(jié)論 本研究對(duì)使用 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵泵送溶液以在紫外-可見分光 光度計(jì)中進(jìn)行測(cè)量與手動(dòng)填充和排空標(biāo)準(zhǔn)比色皿進(jìn)行了比較。 結(jié)果證明，蠕動(dòng)泵與手動(dòng)測(cè)量的精度相當(dāng)，且測(cè)量速度加快 65%。 使用兩種不同設(shè)置測(cè)得的樣品吸光度非常一致。所有六次測(cè)量 結(jié)果的 %RSD 為 0.1869，表明該方法的精密度很高。 當(dāng)使用 Cary 3500 紫外-可見分光光度計(jì)的同步測(cè)量功能同步 測(cè)量三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)比色皿樣品時(shí)，比逐個(gè)測(cè)量三個(gè)樣品的速度加快 了 24%。 蠕動(dòng)泵設(shè)置通過(guò)儀器軟件進(jìn)行控制，并可作為儀器方法的一部 分進(jìn)行存儲(chǔ)。這樣可以確保在分析中采用一致的設(shè)置。 結(jié)果證明，配備 Cary Sipper 蠕動(dòng)泵的 Cary 3500 紫外-可見分 光光度計(jì)是常規(guī)測(cè)量多個(gè)液體樣品的理想儀器。它提供了更快 的分析速度，并在工作流程中節(jié)省了大量的時(shí)間。Cary 3500 具有寬吸光度范圍，可減少對(duì)樣品稀釋的需要，與使用比色皿 手動(dòng)測(cè)量樣品相比，可提供更高的精密度和準(zhǔn)確度。