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超濾離心管如何使用？
超濾離心管如何使用？
【問】：millipore超濾離心管想重復使用，請問如何清洗和保存？
最近使用超濾管，由于管子較貴，想重復用幾次，但找不到可靠的資料。不知如何清洗和保存，比如有人說用DIE氮化鈉，有人說用氫氧化鈉，有人說用乙醇浸泡。莫衷一是。很急用。
【回答精要】
使用后用0.1M NaOH泡24h，然后20%乙醇浸泡保存。
這個我是聽老板們說的，的確乙醇泡完后孔徑會增大，基本就是5-10KD最大，也就是說如果你的蛋白在21KD以上，應該沒問題。或者可以不用乙醇泡，用NaOH洗之后直接用無菌水保存，每周換一下液體，應該沒有問題。
看看說明書不就結了！我原來在CRO的時候一直是重復用的，也沒見什么不好啊！短期會用的話，用20%的乙醇泡著，回頭拼命用millipore的水充干凈，然后在用樣品緩沖液平衡一下就好，至于有些人說的改變孔徑，也沒那么大影響的，你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個月以內不用的話，建議用100mM的NaOH保存！更長時間的話加0.02%的疊氮鈉，但那個東西強致癌物，不建議使用。
理論上截留目標物，孔徑應選1/3~1/5的膜；透過目標物，孔徑應選5-10倍的膜。
【問】準備用millipore 的超濾離心管從細胞培養上清液中濃縮蛋白，在園子里找到一些關于濃縮蛋白的一些帖子，但還有些問題還是向園子里的大蝦請教一下。我們定的是Amicon Ultra 15ml規格的管子，不知道有沒有誰以前做過的，有關于轉速，時間給一些建議，另外細胞上清液離心前是否需要什么預處理？離心之后回收蛋白時怎么盡量減少損失？如果要把管子重復利用，NaoH清洗后，如何在20%的乙醇中保存？是將其浸到乙醇中防于4度，還是在管子中灌入乙醇？
【回答精要】
我用過5ml的管子，當時使用的轉速是4000rpm 8min，可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul，這僅供參考，具體情況還要由您的樣品決定。
我保存5ml管子的方法是把內管取出，浸泡于裝有20％乙醇的燒杯中。四度保存。
該種管子可以脫鹽濃縮但不宜根據截留半徑做分離蛋白用。
我用的是3500g，4度離心，時間可以自己控制，取決于你最終的濃縮體積，我一般是200ul左右。
千萬別一下離心時間太長，不同的蛋白濃縮的速度不同，有的需要長時間離心，有的則一下子就好。當然也和你的蛋白是否比較純，所用的是什么buffer，還有蛋白的濃度有關系。所以離心時要先短些時間觀察一下你的濃縮速度，不要一下子濃縮過了，甚至形成沉淀就得不償失了。
另外其實他們的管子都設計的是一次性使用，所以如果想重復使用，不要離得速度太高，4000－4500RPM就差不多了，另外重復使用時要看看管壁上有沒有裂紋，現在的管子好像不如從前的結實了。
用后把管子用純水洗干凈，離心少時，洗一下膜，再象propeg主任說的那樣收起來即可。使用多次后若覺得有些堵，就可以用NaOH泡泡，離心幾分鐘，應該會有改善。
純化多肽，截斷分子量可以選10倍，純化球蛋白，截斷分子量可以選3倍，如管子要重復使用，轉速設最大轉速（G）的80％左右，不然時間長了塑料就裂了，膜也容易出問題。
離心后管子用MilliQ水清洗干凈，浸泡在水中，4度保存就行了，不放心就放點防腐劑，但是這個管今后只能用來離心同類的樣品哦。
超濾損失蛋白是正常的，樣品體積大就分批離心，別搞的離心時間太長，樣品里的雜質如果可能盡量在離心前去除一些。
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