1. 選擇表達載體時,要根據所表達蛋白的最終應用考慮。如為方便純化,可選擇融合表達;如為獲得天然蛋白,可選擇非融合表達。
2. 融合表達時在選擇外源DNA同載體分子連接反應時,對轉錄和轉譯過程中密碼結構的閱讀不能發生干擾。
3. 菌液OD值要小于1,否則細胞太濃太老,不易破碎,且質粒易丟失。
4. 誘導時間最好做一個梯度,不同蛋白誘導時間需摸索。
5. 誘導溫度適當摸索:25、30℃。
6. IPTG濃度:一般在1 mM 以內,可適當摸索。
7. 超聲條件可視實際情況改變,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。
3. 菌液OD值要小于1,否則細胞太濃太老,不易破碎,且質粒易丟失。
4. 誘導時間最好做一個梯度,不同蛋白誘導時間需摸索。
5. 誘導溫度適當摸索:25、30℃。
6. IPTG濃度:一般在1 mM 以內,可適當摸索。
7. 超聲條件可視實際情況改變,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。
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