甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書

甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑是一種旨在使用烷化劑甲磺酸乙酯誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生變異而產(chǎn)生HPRT或TK基因功能缺失的突變株，成為篩選應(yīng)用標(biāo)記細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物細(xì)胞和人體細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，突變頻率高。

技術(shù)背景

甲磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate，EMS）是一種化學(xué)誘變致畸的烷化劑（alkylating agent）。它將導(dǎo)致細(xì)胞次-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase；HPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（thymidine kinase，TK）基因座發(fā)生位點突變，而引起基因功能缺失。由此采用6-硫氫基鳥糞嘌呤（6-thioguanine；6-TG）和5-溴脫氧尿嘧啶（5-Bromodeoxyuridine；BudR）分別篩選TK和HPRT缺失型細(xì)胞，因為6-TG是PURINES的結(jié)構(gòu)替代物，而BUdR是THYMIDINE的結(jié)構(gòu)類似物，當(dāng)TK和HPRT正常的情況下，它們將利用6-TG和BUdR進(jìn)行DNA復(fù)制而使細(xì)胞死亡，反之，它們無法利用，細(xì)胞則繼續(xù)生存。這是負(fù)向選擇。但是HPRT正常的細(xì)胞（例如正常人體細(xì)胞，其X染色體的長臂上帶有此基因）能在氨基嘌呤胸苷（hypoxanthine/aminopterin/thymidine；HAT）培養(yǎng)基中生長，這是正向選擇。

產(chǎn)品內(nèi)容

 甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書

 EMS 溶液A（Reagent A）         5毫升

 EMS 溶液B（Reagent B）     5毫升

 EMS 溶液C（Reagent C）     5毫升

 EMS 溶液D（Reagent D）     5毫升

 EMS 溶液E（Reagent E）     5毫升

清理液（Reagent F）      2 X 500毫升

染色液（Reagent G）        200毫升

 TK篩選液（Reagent H）    12毫升

產(chǎn)品說明書              1份

保存方式

 甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書

 TK篩選液（Reagent H）保存在－20℃冰箱里；清理液（Reagent F）和 EMS溶液保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent G）保存在室溫下； EMS溶液具有毒性，注意操作安全。有效保證6月

用戶自備

 甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書

25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶：用于培養(yǎng)細(xì)胞的容器

75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶：用于培養(yǎng)細(xì)胞的容器

 DMEM*細(xì)胞培養(yǎng)基（12052）：用于細(xì)胞培養(yǎng)的營養(yǎng)基

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細(xì)胞脫離

血細(xì)胞計數(shù)器：用于細(xì)胞計量