上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱：NIH-3T3細胞|NIH-3T3-LUC小鼠成纖維熒光素酶標記

包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書

細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運輸方式：快遞運輸

售后：收到細胞后12天，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

?Hepa 1-6細胞 Hepa 1-6小鼠肝癌細胞

?三、細胞生長條件：

一、組成：

組份 數目

細胞 1 T-25瓶

細胞說明書 一份

二、細胞簡介：

生長特性： 貼壁生長

細胞來源： 從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件： 培養基：1640 +10%FBS（推薦德國BI 04-002-1A

優等胎牛血清）

氣相：空氣95%，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養： 一、貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代；

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，di一次傳代比例為1:2。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（di一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為佳消化時間，記錄佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進行傳代。

二、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清；

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養基，然后將其置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養基）；

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳代，di一次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養）。

細胞總數： 1~3*106

傳代周期： 2-3天

傳代比例： 1:2~1:4

換液頻率： 2-3天

凍存液： 90%FBS+10%DMSO

四、注意事項：

1 收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2 瓶中運輸的培養液不能重復使用，請換新鮮培養液培養

3 對于貼壁細胞，若大部分細胞漂浮，置于培養箱隔夜觀察，大部分漂浮細胞重新貼壁，表明細胞活力正常，繼續培養，剩余漂浮的細胞可以去掉；若大部分細胞仍然不貼壁，將漂浮的細胞離心收集，用臺盼藍染色鑒定細胞活力，并與本公司銷售人員及時聯系。

4 建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞的照片，記錄細胞狀態，如細胞狀態出現問題請于72h內與本公司銷售聯系，以便于更好的幫您解決問題，超過時間我段，本公司則默認細胞狀態良好，不免費對后續細胞狀態問題進行售后。

 NIH-3T3細胞|NIH-3T3-LUC小鼠成纖維熒光素酶標記

做細胞實驗的同學看過來。

選擇上海琛藝生物細胞有3個理由：

1、細胞狀態好，形態佳，易成活，是市面上比較好養的細胞之一;

2、物流迅速，復蘇好后發貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養實驗，效果更佳。

細胞保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復蘇至T-25培養瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優缺點，di一種方式的優點是可以長途運輸，因為細胞在干冰中相對穩定，一般可以保證數周之內不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞復蘇是很復雜的過程，如果細胞復蘇后狀態不佳，則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題；而第二種方式的優點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態，并且對運輸的要求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養基中不添加血清，細胞還是會不斷增殖，當細胞長滿后，細胞的狀態會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用di一種方法，既能適應長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好，在良好的操作下復蘇成活率很高；如果是從國內細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態，并且降低運輸成本。

細胞分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經沒有干冰，則細胞狀態可能會收到影響，建議盡快復蘇；如果有足量干冰，建議先轉移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養基，輕柔吹勻后轉移至培養皿中，補足培養基；一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態，懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態。對于凍存時間較長的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會調整到正常狀態，所以細胞復蘇后如果狀態不佳，不要灰心，仍要細心培養。

對于復蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體受損。如果發現細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養箱中靜置1-2h。待細胞穩定后，觀察細胞狀態，并及時記錄，因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態的，如果收到時細胞狀態不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養基。由于新細胞一般都是di一次接觸，細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細胞狀態，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

一、實驗前準備工作：

1、培養瓶的包被：包被液如多聚賴氨酸（PLL，ScienCell品牌）或纖維粘連蛋白（BPF，ScienCell品牌），以無菌水稀釋至2 ug/cm2的濃度包被培養瓶。37度孵箱1小時或4度過夜，從包被好的培養瓶中回收多聚賴氨酸，并用無菌水洗滌培養瓶2遍。包被好的培養瓶不要放置超過24小時，其中的包被液可吸出重復使用2-3次，注意不要污染。

2、*培養基的配置：以內皮細胞培養基（ECM，ScienCell品牌）為例，把配套的胎牛血清（FBS，ScienCell品牌）、生長因子（ECGS，ScienCell品牌）和雙抗（P/S，ScienCell品牌）加入基礎培養液（ECM，ScienCell品牌）中。重新貼好標簽，并混勻培養基。

二、原代細胞復蘇方法：

1、從液氮中取出原代細胞冷凍管，迅速投入37～38 ℃水浴中，其間可以輕輕轉動細胞，加快融化速度，大約需要1分鐘時間。

2、5分鐘內用培養基稀釋至原體積的10倍以上，加入培養瓶中，再用1ml培養基洗滌細胞凍存管，保證細胞都被加入培養瓶中，靜置于孵箱，12-16小時后更換培養基（除去DMSO）。以后每2天換一次液，保證細胞狀態良好。

三、原代細胞傳代方法：酶消化法

當細胞生長至70-80%左右可以傳代，傳代比例以1:2或1:3為佳。具體方法如下：

1、棄去培養瓶中培養基，用PBS洗滌培養瓶2遍，加入0.25%的胰酶消化液（Trypsin-EDTA，ScienCell品牌，貨號0103），以消化液能覆蓋整個瓶底為準。37度孵育4分鐘左右，輕拍培養瓶側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況，直到80%細胞呈現圓形。

2、細胞消化好后，加入胰酶中和液（TNS，ScienCell品牌，貨號0113），并輕輕搖動培養瓶，形成細胞懸液，然后將細胞和培養基轉移至離心管中，1000rpm離心5分鐘。

3、棄去上清液，以1-2ml新鮮培養基重新懸浮細胞并吹打均勻，接種于包被好的新培養瓶中，瓶中已有10ml左右的培養基，放入培養箱中培養，每2天更換培養基。