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泌乳素(PRL) ELISA試劑盒說明書

來源:深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司   2011年05月30日 11:27  

泌乳素(PRL) ELISA試劑盒德國DRGEIA1291)

1、實驗原理
   DRG公司的泌乳素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合泌乳素分子上*抗原位點的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性泌乳素的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中泌乳素的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后,顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中泌乳素的濃度成正比。
2、試劑盒成分
1)       微量反應(yīng)板,1塊 ( 96孔) ,微孔中包被了抗泌乳素的單克隆抗體。
2)       酶聯(lián)物,11ml,辣根過氧酶標(biāo)記的泌乳素抗血清。 
3)       底物液,11ml (TMB)
4)       標(biāo)準(zhǔn)系列,6支(凍干粉),濃度:0;5;20;50;100;200ng/ml
轉(zhuǎn)換系數(shù)(1ng/ml=21.1mUI/mL)
5)       終止液,0.5M的 H2SO4,6ml
3、實驗需要器材(但試劑盒不提供)
1)       酶標(biāo)儀(450±10nm)。
2)       移液器
3)       吸水紙
4)       標(biāo)準(zhǔn)水箱
5)       蒸餾水
6)       計時器
4、試劑貯存:
   未開啟的試劑在2—8℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑,酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在2—8℃下貯存。
   微孔反應(yīng)板必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開,必須將它小心地嚴(yán)封起來。如果包被板的包裝被打開,其免疫活性在2個月內(nèi)穩(wěn)定,但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。
5、樣品的采集
1)       靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下用離心機(jī)分離血清,避免溶血。注意:此試劑盒只能使用沒用任何添加劑的樣品。
2)       必須蓋住樣本并在實驗之前于2-8℃下可貯存48小時。樣品需要更長的貯存時間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣本在檢測之前必須上下倒置幾次。
注意:用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。
6、試劑的準(zhǔn)備
參考標(biāo)準(zhǔn):在凍干的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0ml雙蒸水。
注:配制好了的標(biāo)準(zhǔn)品可在2-8℃下穩(wěn)定存放2個月。想要存放更長時間應(yīng)當(dāng)將其凍存于-20℃的環(huán)境下。
7、一般注意事項
1)       實驗開始前,將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時避免起泡。
2)       實驗一旦開始,所有的步驟應(yīng)完整地進(jìn)行下去。
3)       每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。
4)       吸光度與溫育時間和溫度有關(guān),在實驗開始后所有的試劑都應(yīng)準(zhǔn)備好,以保證加液時間的一致。
5)       本試劑盒zui大吸光度(OD)在1.200-2.000之間(室溫22℃,顯色10分鐘以內(nèi))。如果zui大OD值高于您酶標(biāo)儀的上限或低于1.000,則相應(yīng)的減少或延長顯色反應(yīng)的溫育時間。一般情況下,酶免反應(yīng)的強(qiáng)度與時間和溫度成線性,這使得操作者應(yīng)當(dāng)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整物理化學(xué)環(huán)境。
8、實驗步驟
1)       將所需數(shù)目的板條置于板架上。
2)       將黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)系列(0;5;20;50;100;200ng/ml)、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應(yīng)的微孔中,每一樣品都得使用新的取樣吸頭。
3)       加100μl的抗泌乳素酶聯(lián)物于各孔中。
4)       混勻10秒,此步驟中*混勻很重要。
5)       室溫溫育(22℃)30分鐘。
6)       棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。
7)       用蒸餾水洗板5次。
8)       在吸水紙上把板拍干。
9)       依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。
10)   室溫(22℃)溫育10分鐘。
11)   按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。
12)   10分鐘內(nèi)在450±10nm波長讀吸光度。
9、結(jié)果計算
1)       計算每個標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。
2)       用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對其相應(yīng)的濃度值(mIU/ml)進(jìn)行標(biāo)繪,作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3)       用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。根據(jù)自己的實際經(jīng)驗或計算機(jī)的功能,也可以采用其它的歸納方法進(jìn)行計算。
4)       如果樣本的濃度高于zui高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的濃度或者濃度>200ng/ml,則需要進(jìn)行稀釋,任何稀釋了的樣品在計算時都必須將相應(yīng)的稀釋因子考慮進(jìn)去。
10、參考值
我們強(qiáng)烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準(zhǔn)得出的實驗結(jié)果:

性別
平均值(ng/ml)
S.D.(ng/ml)
5%(ng/ml)
95%(ng/ml)
男性
6.44
5.50
0.94
20.94
女性
14.27
5.88
2.39
25.15

 
靈敏度:zui小檢測出的泌乳素濃度為0.35ng/ml
 
 
 
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準(zhǔn)。
 
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