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森林腦炎ELISA檢測試劑盒說明書

來源:廣州創侖生物制品有限公司   2019年07月24日 16:40  

森林腦炎(蜱傳腦炎)病毒ELISA檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

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【產品名稱】:森林腦炎ELISA檢測試劑盒說明書

【預期用途】

本試劑盒可用于定量檢測人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒(TEBV)的IgG抗體,從而控制體液免疫狀態和確定疫苗接種后的血清轉化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染,通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測。

 

【實驗步驟】

1.       將200μL已稀釋的校準品、質控品和樣本加到相應的微孔中。

2.       用封板片封板,室溫下(18-25℃)孵育1小時

3.       揭去封板片,棄去反應液,用稀釋后的洗滌液洗板3次(250μL/孔/次),后通過拍板拍去殘留的液體

4.       將200μL已稀釋的酶聯物加到每個孔中

5.       用封板片封板,在室溫下(18-25℃)孵育1小時

6.       重復步驟3

7.       將200μL  TMB底物液加到每個孔中

8.       室溫(18-25℃)孵育30分鐘

9.       按加TMB底物液的順序,將50μL的終止液加到每個孔中,輕輕混勻

10.   在加入終止液后10分鐘內,用酶標儀在450nm±10nm處讀數。

【結果的計算】

1.       標準曲線方法

在半對數紙上(或者使用自動化儀器)以每個標準品的OD值為Y軸,相應的濃度為X軸做出標準曲線,推薦使用4參數邏輯函數(Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b))。

樣本的濃度應當直接從標準曲線中讀取,如果有稀釋,則在計算中應該乘以稀釋倍數,如果樣本的濃度過高,則需要按照實驗前設置說明稀釋樣本。

2.       一點標定法

(1)       樣本濃度的手冊檢測

需要使用用校準品4、質控血清和樣本各自的平均OD值。校準品4的OD必須要在的范圍內(見一點標定法評估表)。每次檢測都必須計算檢測特殊的校正因子。校準品4的理論OD值都是按特定批次檢測得出的(見一點標定法評估表)。將質控血清和樣本的OD乘以校正因子:

質控血清和樣本濃度可以從批次參考曲線中讀出。

例子:

校準品4的理論OD值                  OD=1.377

校準品4的檢測OD值                  OD=1.273

校正因子F                             F=1.082

樣本的檢測OD值                      OD=0.937

樣本的校正OD值                      OD=1.014

讀取濃度                         0.5VIEU/mL

(2)       腦脊髓液樣本濃度的計算(一點標定法軟件)

打開名為“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件,將QC證書的下列指標填到Excel中:

校準品4的理論OD值

校準品4的OD范圍

臨界1和臨界2的理論OD值

臨界1 OD=灰區的低點

臨界2 OD=灰區的高點

填入檢測到的校準品4平均OD,將腦脊髓液樣本的鑒別和OD插入到已準備好的計算單中。腦脊髓液樣本的求值和OD都會自動完成。

【結果的判定】

血清/血漿

<63VIEU/mL         陰性

63-126VIEU/mL       灰區

>126VIEU/mL        陽性

腦脊髓液

OD<臨界1理論OD                      陰性

臨界1理論OD<OD<臨界2理論OD       灰區

OD>臨界2理論OD                      陽性

【結果的說明】

1.       疫苗

通過檢測血清血漿中的抗TBE的IgG抗體來證明血清轉化

(1)       抗TBE IgG陰性

接種疫苗后無血清轉化

(2)       抗TBE IgG 灰區

可能有血清轉化,建議在2~4周內再次檢測

(3)       抗TBE IgG陽性

接種疫苗后有血清轉化

2.       感染

(1)       抗TBE IgM和抗TBE IgG 陰性    

無感染

(2)       抗TBE IgM陰性和TBE IgG 陽性  

這可能是潛在的免疫或者是幾周或幾月之前的感染

(3)       抗TBE IgM陽性和TBE IgG陰性

可能有新近感染

(4)       抗TBE IgM和抗TBE IgG都陽性

有感染

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