寫在前面

隨著 4+7 帶量采購方案的實施，制藥企業愈發重視新藥研發和創新，也對藥物分析工作提出了更高的要求。分析不同的樣品時需要采用不同的柱子，而柱子的選擇卻難倒了不少“英雄漢”：

有時候樣品在這根柱子上分不開，換一根也分不開，再換一根還是分不開

有時候發現兩根 C18 柱子上的分離結果有著天壤之別

有時候使用速度更快的柱子，卻又不太習慣 

C18 柱，也叫 ODS 柱，是分析工作中使用zui多，應用zui廣的液相色譜柱，占據了液相色譜柱的半壁江山。正如世界上沒有兩片*相同的樹葉，也沒有兩款一模一樣的 C18 柱，如何在市場上繁雜的 C18 柱中尋找到適合自己分析的那款，是一個值得深入探討的話題。

今天，整理了各種 C18 柱的異同，并幫助分析工作者在日常工作中更好地選擇合適的色譜柱。 

液相色譜柱分類 — C18

液相色譜柱根據極性分為正相柱和反相柱。

正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還C8,C4,C2和苯基柱等。

液相色譜柱的使用 — C18

1、適用pH范圍

反相柱優點是固定相穩定，應用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質的填料，使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動相的PH值小于2時，會導致鍵合相的水解；當PH值大于7時硅膠易溶解；經常使用緩沖液固定相要降解。pH過高或過低還可能會損害密封圈和柱塞桿以及色譜柱更 嚴重的是當PH大于9.5時會破壞流通池的石英玻璃如果發現上述情況，色譜柱入口會發生塌陷。

2、樣品的前處理

a.使用流動相溶解樣品；

b.使用針頭過濾器（0.45um濾膜）出去樣品的可見異物。

3、流動相配制

a.流動相對樣品具有一定的溶解能力，并且保證樣品不會在色譜柱內析出或長時間留在色譜柱內；

b.流動相不與樣品發生反應；

c.流動相粘度盡量小，使樣品得到分離的同時降低柱壓，延長色譜柱壽命；

d.流動相沸點不能太低，避免有氣泡產生，影響實驗進行；

e.流動相要保證現配現用，不能儲存太久，避免流動相生成雜質微生物影響檢測；

f.流動相使用前先脫氣。

液相色譜柱的表征 — C18

雖然我們講的是 C18 的不同，但其實 C18，C18H37 這個基團都是一樣的，不一樣的是除了 C18 以外的其它各種因素。

硅膠顆粒 — 孔徑和比表面

孔徑的大小和比表面是相互影響的，又會進一步影響碳載量，再進一步影響保留、分離、載樣量以及穩定性。

鍵合相

• 碳載量

測試得到的碳載量是包括了填料中所有碳的百分比，但僅僅 C18 鍵合相上的碳才是zui有意義的碳，所以鍵合相密度更能有助于比較不同載體填料的 C18 的量。對同類型的填料而言，大多數化合物在高碳載量柱子上保留因子大于低碳載量的柱子，但堿性化合物這樣強極性的化合物除外。

• 封端與修飾

封端有著諸多的好處，但也有一些壞處，因此各色譜柱公司推出色譜柱的封端的程度，都是對各種情況的一種平衡。極性修飾的 C18 能夠引入更多的作用力幫助分離，而不封端的 C18，是否也能看成某種極性修飾？

硅膠類型 — 封端對保留與峰型的影響

硅膠類型與封端與否的兩兩組合。封端的B類硅膠峰型，不封端的A類硅膠有著zui強保留。

硅膠顆粒

• 粒徑 — 向左，制備向右

一般大粒徑填料因為壓力低，耐臟，用來做半制備或者制備，而小粒徑填料，一方面允許采用更短的柱子來達成所需的柱效，另一方面更能抵抗因為高流速而帶來的柱效下降，適合于做分析。小的粒徑，配合更小柱外體積，以及能夠耐受更高壓力的儀器，越能夠發揮其優勢。

• 粒徑的優劣勢對比

各種粒徑的硅膠都有著對應的優缺點，需要結合自身的實際情況才能更好發揮各種顆粒的優勢。而其中 5µm、3.5µm 的全多孔顆粒（TPP），以及 2-3µm 的表面多孔型顆粒（SPP），有著zui高的綜合總分。

Poroshell 是一種趨勢

• CHP_硝酸異山梨酯

以 Poroshell 為代表的 SPP 越來越為各大標準制定機構所接受。2.7µm 的 SPP 滿足快速分析，但又對儀器、流動相和樣品的包容性更優于亞 2µm 的 TPP。這是安捷倫和中國藥典委聯合出版的應用圖譜集，15 版的實驗已經完成，正在出版中。

• EP & USP & JP

在 EP、USP 和 JP 聯合協調的一則文件上，明確表示無論是等度，還是梯度，從TPP 改用 SPP 色譜柱是允許的，這也體現了主流藥典機構的認可。

鍵合相+硅膠 — 作用力與疏水減法模型（HSM）

疏水減法模型是覆蓋面zui廣的，用于評價各種色譜柱與指針型化合物之間各種作用力的模型，目前已經包括了超過 700 根色譜柱，尤其適合 C18 色譜柱的評價。

色譜柱選擇性差異

• Plus C18 與 SB C18

• Fs 在 3 以內，兩根柱子基本上接近；

Fs 在 3-10，類似，特別是待測物不多，分離度大于2的；

Fs 在 35-100，對于非離子型化合物來說，正交；

Fs 在 100 以上，對于包括離子型化合物的樣品來說，正交

Fs 的值表明兩根色譜柱之間的總體差異的大小

• 不同化合物不同pH不同柱子的總體差異

泛泛來看，B 型封端的 C18 比較接近，B 型硅膠極性封端的 C18 近似但有差異，而A型封端的 C18 有著zui大的不同。這張圖有助于幫助我們區分各種類型 C18 之間的差異。

液相色譜柱的使用注意事項

1、新色譜柱使用

a.先用10-20倍柱體積的色譜級甲醇或乙腈由低流速緩慢提高至正常流速沖洗，隨后換至10%甲醇低流速緩慢提高至正常流速沖洗 ； 

b.分清色譜柱方向；

c.盡量在色譜柱前段加保護柱，并定期清洗保護柱。

2、色譜柱沖洗

使用完畢先用10%甲醇/水沖洗，如果長時間不用再用純甲醇沖洗、保護。（一般情況下，10%甲醇/水低流速沖洗過夜）

3、色譜柱再生

用相當于20倍體積的溶劑按順序沖洗柱子，盡可能按照色譜柱箭頭方向沖洗，盡量不反沖：10%甲醇/水溶液→甲醇 → lv fang（或異丙醇）→甲醇*或用熱蒸餾水（55℃）+四次注射100ulDMSO 。