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牛血清的儲(chǔ)存以及蛋白提取

來源:上海吉至生化科技有限公司   2019年01月04日 16:06  

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等。

胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少,所以胎牛血清是品質(zhì)高的。

儲(chǔ)存條件:

血清一般儲(chǔ)存于-20℃,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后,先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲(chǔ)存于-20℃,使用前融化。融化時(shí)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時(shí)間存放,應(yīng)盡快使用。

牛血清蛋白熱乙醇法提取工藝:

1、分離血漿、取新鮮牛血放入制冷功能離心機(jī)中,加入血量的10%的濃度為3.8%的枸櫞酸鈉、離心溫度2°C以下,分離血漿、血球、收集血漿、血球另用。

2、將血漿放入夾層反應(yīng)罐內(nèi)、夾層內(nèi)加熱水,邊加熱水邊加入牛血清容積的0.2-0.3%的辛酸鈉、緩慢攪拌、溫度在55°C-65°C,溶解后調(diào)PH值、加入濃度為1摩爾的鹽酸、將PH調(diào)4.6.5然后加入血清總量的5.5%的濃度為95%的乙醇、過濾濾渣去掉。

3、脫鹽和濃縮、將濾液用20000分子量以下的超濾器洗脫鹽類及其它小分子雜志同時(shí)進(jìn)行濃縮。

4、凍干、將濃縮液按凍干即將濃縮液迅速冷凍-40°C、持續(xù)1小時(shí)左右,升到-25°C、持續(xù)10-20小時(shí)再緩慢升溫到0°C再持續(xù)1-4小時(shí)升溫保存溫度20°C為成品。

 

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