Molecular Devices CatchPoint cAMP熒光檢測試劑盒應用方案解析
本研究展示了如何在 SpectraMax® i3多功能酶標儀中應用CatchPoint® cAMP熒光試劑盒監測腺苷酸環化酶激活劑forskolin對HEK293細胞的影響(如圖1)。G蛋白偶聯受體(GPCRs)是重要的跨膜蛋白,能將胞外信號傳導入胞內,引起信號逐級放大的級聯反應,導致胞內某些蛋白活性或表達的改變[1]。3’, 5’-磷酸化環腺苷(cAMP)作為第二信使參與GPCR活化后的下游反應。當胞外配體作用于GPCR時,GPCR構象發生改變,激活胞內連接的G蛋白。接下來的信號傳導路徑與被激活的G蛋白類型有關。其中當Gs蛋白被激活時,會導致腺苷酸環化酶活化引起的胞內cAMP濃度上調,進一步激活蛋白激酶A,zui終促進一些目標蛋白的磷酸化,這些目標蛋白可能參與了例如多巴胺神經信號傳導、葡萄糖再生反應、血管擴張、細胞有分裂、卵子成熟等重要生理生化過程[2-6]。CatchPoint® cAMP熒光檢測試劑盒采用免疫競爭原理測得cAMP濃度(如圖2),僅需一步洗脫,且反應底物加入后短可放置10分鐘,長可延至24小時后再檢測,信號穩定靈敏。
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