50%溶血試驗即求得能使50%致敏羊紅細胞發生溶血的zui小量血清，然后計算出每毫升血清中補體含量。

以補體量作為橫坐標，溶血百分數作為縱坐標，可得到一個清晰的“S”形曲線。在50%溶血周圍，線段近似一條直線。因此當補體用量稍有變動，就可對溶血程度發生很大影響。所以用50%溶血作為終點要比100%溶血更為敏感。

50%溶血試驗定血清中補體含量用以下公式表示：每毫升血清中補體含量（單位）=（1/血清用量）×稀釋倍數。

該公式可以從Von Krogh 方程式進一步加以論證：x=k[1/（1-y）]^1/n。假定X=加入的新鮮血清量，y=溶血的百分率，以小數表示，V=斜率，k=常數，轉變成對數，上述公式就變成：logx=logk+1/n log[y/（1-y）]，當以50%溶血作為終點時，y/（1-y）=0.5/（1-0.5）=1，代入上述公式，log x=log k+1/n log1，由于-log1=0，log x=log k，x=k，也即表示補體的50%溶血單位k就是加入的新鮮血清量。

材料及器材

1、稀釋液（磷酸鹽緩沖生理鹽水）：

使用時取此原液50ml，加90ml蒸餾水，經高壓滅菌后即可使用。加入100%硫酸鎂溶液1ml，可增強補體的效能；

2、綿羊紅細胞懸液（1×10g/ml）；

3、溶血素（2U）；

4、被檢血清（新鮮豚鼠血清）；

5、水平離心機；

6、水浴箱；

7、721型分光光度計。

方法

1、濃度為1×10g/ml的綿羊紅細胞配制 取經稀釋洗滌后的綿羊紅細胞配成較5%稍濃的細胞懸液。取50%細胞懸液1ml，加于14ml蒸餾水中測 O.D值為DI按下式求出于一定體積的5%細胞懸液中應加入稀釋液的毫升數。

Vf=Vi（Di-Ds）/Ds，Vi為配制的50%細胞懸液體積，Vf為于一定量5%細胞懸液中應加入稀釋的ml數Ds為已知標準化的1×100個細胞/ml懸液的OD₅₄₀值-0.385。

2、致敏綿羊細胞 取綿羊紅細胞懸液（1×102/ml）加等量的溶血素（2U/ml）。充分混合。置37℃水浴中作用30分鐘，每隔10分鐘搖動一次以免細胞下降即成5×108/ml致敏羊紅細胞。

3、補體CH50單位測定

（1）按下表加樣；

（2）將各管充分混合，置37℃水浴中60分鐘（搖動1～2次，以免紅細胞下沉）；

（3）從水浴中取出后，立即將各管以2000轉/分離心10分鐘，將各管上清液分別移于另一試管；

（4）測定各管上清液OD值（波長＝540nm）。

4、補體CH50單位的計算 從測定管（第1～5管）及溶血對照管（第6管）的OD值中減去紅細胞對照管（第7管）的OD值。再減去按待測血清每管實際用量計算出的血清色度OD值（80/800ⅹ該管實際量ⅹ第8管OD值）。即為測定管的校正OD值。然后計算各測定管的溶血率（y值），再計算各管的y/（1-y）值。在雙對數坐標紙上，以y/（1-y）值為橫坐標，血清用量為縱坐標，得到一條直線。由于50%溶血（y=0.5）的y/（1─y）值等于1。即可由橫坐標等于1的一點，在直線上求得在縱坐標上相應的截距，此即產生50%溶血的待測血清實際用量。zui后，按下列公式計算出每毫升待測血清的總補體活性，以單位/毫升表示之。