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熒光分光光度計在使用時應該設置哪些產品參數
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。
熒光分光光度計工作參數條件的選擇
1.激發波長的選擇
該怎么確定激發波長與發射波長呢?對許多儀器初學者來說，這是個令人感到困擾的問題。如果儀器有三維掃描功能，那就比較簡單，放樣品進去，按照說明書要求做三維熒光掃描，可以很方便地確定出合適的激發波長與發射波長。如果儀器沒有三維掃描功能，一般的方法如下。
首先，將儀器的激發波長(λem)先設定為200nm，然后進行發射(EM)模式掃描，發射波長(λem)掃描范圍暫設定為210～800nm，記錄所有出現的峰值波長；改變激發波長(λem)后再掃描，如第二次發射圖譜中的某個(或某些)峰的位置沒有位移(或位移很少)，一般來說這個(或這些)峰就是熒光峰；因為熒光峰的位置是不隨激發波長的改變而改變的，僅是峰高(或峰面積)發生改變。
然后，將確定的熒光峰的波長作為發射波長(λem)固定下來，再做激發波長(Ex)的掃描，激發波長的范圍要小于發射波長；如果僅出一個激發峰則很簡單確立下來，再將這個波長固定下來重新做真正的發射波長(EM)掃描，可以得到具有良好信噪比的結果；如果做激發波長(EX)掃描后出現幾個峰，則根據經驗來選擇，一般應選擇峰形、高度適合且有一定帶寬的峰作為激發波長。也可以參考熒光光譜的特性——激發光譜與發射光譜呈鏡像的特點來確定激發波長。
2.濾光片的選擇
在進行發射圖譜掃描分析時，根據斯托克斯定律，設置的激發波長要比發射波長短，例如，激發波長λex=260nm，則發射起始波長應該從大于260nm的波長開始，比如270nm，發射結束波長為870nm。這樣一來，在激發光的2倍波長(520nm)、3倍波長(780nm)處都會出現激發波長的尖銳的倍頻峰，若與熒光光譜峰重疊，將會對測試產生干擾，需選用合適的濾光片將其濾掉。
倍頻峰就是激發光的散射峰，雖然波長掃描到雙倍波長的時候出現，但實際波長卻是激發波長，可以通過增加高通濾光片來去除倍頻峰。高通濾光片一般放在發射處，片上都標明其可以濾除的大波長。也就是說，體系中增加高通濾光片后，比其上所標波長低的光，也包括這些光的二倍波長光、三倍波長光，會被濾掉；而比其所標波長高的光則可以順利通過。
3.狹縫的設置
熒光強度跟很多因素有關，如分子結構、存在狀態、溶液濃度或薄膜厚度、溫度、選擇的激發波長、測試狹縫寬度等因素。熒光強度在不同儀器上的測量值存在較大差異，不具有可比性，但是其峰位還是較容易確定的，可以用來判斷何種物質。進行熒光定量分析，必須固定一些條件。
狹縫的大小對熒光強度很重要，狹縫大小可根據你所測物質的熒光強度大小作出適當的調整。在同一濃度，如熒光強度過大，超過儀器量程，可減小狹縫。但是，需要指出的是，不能僅憑狹縫的大小來改變熒光強度，還要考慮分辨率的問題。對于熒光掃描而言，狹縫加大可以使熒光強度提高同時重現性得到提高，但是分辨率隨之降低。狹縫決定分辨率，儀器其它結構已經固定(光柵的刻線數、焦距以及綜合的線色散系數)，狹縫大小就決定分辨率的高低。對于實際使用，狹縫大小需要和測定的峰的半峰寬相匹配，過大，峰就變形了。狹縫大小也決定了光通量大小。按照經驗數值，狹縫開大1倍，光通量將增大4倍。
4.步長的設置
測量的步長小，測量會慢些，好處足圖譜細膩些；步長大，測量速度快，譜圖就顯得粗糙些。步長設置應該小于需要測量小半峰寬的1/5，因為步長會與分辨率相關的。原則上，步長應小于3倍的狹縫寬度。