液相色譜儀廠家介紹液相色譜法測發酵液中阿魏酸和香草酸、醛
香草醛是食品、飲料等工業應用zui廣泛的香料之一,還可作為保鮮劑及醫藥等工業的原材料。香草醛目前主要由化學方法制備,但化學合成制得的香草醛不屬于天然香料。生物轉化法生產香草醛多采用阿魏酸作為前體物質,轉化過程中會產生香草酸等中間產物。
液相色譜儀廠家相關研究曾采用過薄層色譜法測定阿魏酸、香草酸和香草醛,但是此法定量欠準確,層析時板與板之間重現性較差。因此,研究了能同時測定發酵或生物轉化液中阿魏酸、香草酸和香草醛的反相液相色譜法,該方法的重現性好,準確、可靠,可方便地檢測發酵進程。
實驗儀器:液相色譜儀;微量進樣器,微膜過濾器。
色譜條件:色譜柱 (250mm×4mmi.d.,5μm),流動相為:A=0.01%冰醋酸水溶液,B=甲醇;時間程序:開始時20%B,保持4min,到24min時增加至40%,到27min時增加至100%并保持2min,到30min時又降至20%,并以這種比例使柱子平衡至少5min;流速為1mL/min。檢測波長:280nm檢測;進樣量:25μL;柱溫:室溫。
測定方法
1精密稱取阿魏酸、香草酸、香草醛標樣各0.5g,用甲醇定容至50mL,得到10g/L的標準貯備液,再由貯備液配制一系列不同濃度的3種標樣的混合溶液,用液相色譜儀進行測定,得出結果繪制標準曲線。
2將發酵液或生物轉化液先用濾紙過濾,再加入適量的無水乙醇,離心以除去蛋白質等大分子雜質,在除去雜質的樣品中加入20%的甲醇后,再將其pH值調至5,用0.22μm微濾膜過濾得濾液。
3任意選取3個樣品,按上述實驗方法處理后進樣測定。