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產品簡介：

禽-流感是由 A 型流感病毒所引起的禽類疾病。AIV 除了感染禽類外，部分亞型也能夠引起人感染或發病。H5N6 是AIV 的一種亞型，病毒的來源是禽類，對家禽具有高致病性，但感染人類屬偶發個案，人主要通過呼吸道吸入 H5N6 禽-流感病毒而感染，也可通過密切接觸感染的禽類分泌物或排泄物，比如家禽的糞便、羽毛、呼吸道分泌物、血液等，或直接接觸病毒感染，尚無持續的人傳人證據。

本試劑盒適用于檢測標本中的禽-流感病毒 H5N6，適用于禽-流感病毒 H5N6 感染的輔助診斷及流行病學調查。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產品經過不斷優化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的禽-流感病毒H5N6核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于糞便、羽毛、呼吸道分泌物、血液等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業的研發團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產品線

除了禽-流感病毒H5N6(AIV-H5N6)雙重PCR試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產品參數：

產品規格

50T/盒，可滿足一定規模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優點。

適用儀器

ABI 系列 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96 等熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

保存和運輸

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區）

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術-剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；棉拭子直接取 100μL 提取。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數每滿 10

份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑AIV- H5N6 反應液酶液

用量20μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管。

3.加樣（樣本處理區）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM、VIC， 淬滅通道

（Quencher Dye）選擇 NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環參數設置：

步驟循環數溫度時間收集熒光信號

11cycle42℃20min否

21 cycle95℃10min否

3

40 cycle94℃15sec否

55℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2結果判斷

FAM 通道為禽-流感病毒 H5N6 亞型 H5 基因檢測結果，VIC 通道為禽-流感病毒 H5N6 亞型 N6 基因檢測結果陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質控標準

陰性質控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

3.陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的禽-流感病毒H5N6(AIV-H5N6)雙重PCR試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！