支原體高效清除劑(2000X)

產(chǎn)品描述

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的世界性問題，世界各國的細(xì)胞支原體污染平均比例為30~60%。支原體直徑約為 0.1~0.3μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22~0.45μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體可通過細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染、血清等添加物而帶入污染。由于支原體無法通過常規(guī)的光學(xué)顯微鏡觀察到，不會引起培養(yǎng)基混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長速率，造成代謝物累積，改變細(xì)胞形態(tài)，影響DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。Anweisci支原體高效清除劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，能以較低的濃度殺滅支原體，不僅可用于細(xì)胞株/系，還可應(yīng)用于敏感和較脆弱的細(xì)胞，如干細(xì)胞和原代細(xì)胞。本產(chǎn)品僅12小時就可以顯著抑制支原體生長，1~2周左右即可清除支原體污染，且不影響細(xì)胞本身的代謝，兼具特異性和高效清除支原體的特點(diǎn)，且對細(xì)胞溫和無損傷，挽救您的珍貴細(xì)胞。

產(chǎn)品優(yōu)勢

ê高效性，12h即可有效抑制支原體的增殖；

ê高特異性，特異性清除支原體；

ê無耐藥性，活性成分為多肽類，不會產(chǎn)生耐藥性；

ê高利用率，未被利用的成分可降解為氨基酸被細(xì)胞利用；

ê高安全性，對細(xì)胞幾乎無毒性，已在上百種細(xì)胞上驗(yàn)證。

質(zhì)量控制

R R 通過支原體、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。

R R 通過滲透壓、pH 檢測。
R通過產(chǎn)品性能檢測。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸；

-20℃避光保存，保質(zhì)期2年；

使用方法

從-20℃冰箱內(nèi)取出支原體高效清除劑，將試劑管瞬時離心（3000rpm，3~5s）后放置于EP管架上，

用75%的酒精噴灑試劑管的表面，在生物安全柜中進(jìn)行無菌操作；

以T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例

清除支原體污染操作規(guī)程

對于已檢測或懷疑有支原體污染的細(xì)胞，在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量支原體高效清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為2000×，如：6 mL的細(xì)胞培養(yǎng)基加入3 μL的支原體高效清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周即可有效清除支原體污染。若支原體污染較嚴(yán)重，可酌情增加藥物濃度以提高清除支原體的效率，推薦嘗試最小稀釋倍數(shù)、中間稀釋倍數(shù)、最大稀釋倍數(shù)三個濃度進(jìn)行測試。以細(xì)胞系（成纖維樣）為例，建議將細(xì)胞分為三份，分別采用500×、1000×、2000×三個濃度進(jìn)行支原體清除。若500×對細(xì)胞生長無明顯影響，可采用500×濃度快速清除支原體，若500×對細(xì)胞生長有明顯影響，則采用1000×濃度清除支原體，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測是否還存在支原體污染。如果還存在支原體污染，可繼續(xù)培養(yǎng)1周。

注意：可參考下表選擇稀釋倍數(shù)，達(dá)到最佳清除效果。

支原體高效清除劑(2000X)

預(yù)防支原體污染操作規(guī)程

若細(xì)胞需長時間培養(yǎng)，建議每2~3周進(jìn)行定期預(yù)防。在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量支原體高效清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為3000×，如：6mL的細(xì)胞培養(yǎng)基加入2μL的支原體高效清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周，即可有效防止支原體污染或抑制支原體增殖。
注意：可參考下表選擇稀釋倍數(shù)，有效預(yù)防支原體污染。


實(shí)驗(yàn)流程圖

特別提醒

①使用本試劑前請仔細(xì)閱讀說明書；

②本產(chǎn)品經(jīng)0.1 μm 過濾除菌，使用本產(chǎn)品時無需過濾，可直接加入培養(yǎng)基使用；

③，-20℃保存時不凍結(jié)，使用時無需解凍，從-20℃取出即可使用；

④為了發(fā)揮藥效，含藥培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，如果加藥培養(yǎng)基未用完，于4℃冰箱中避光保存，2周內(nèi)用完，使用培養(yǎng)基前需預(yù)熱至37℃；

⑤貼壁細(xì)胞換液或傳代前，棄去舊的培養(yǎng)基，用含1000×支原體高效清除劑的PBS輕輕沖洗細(xì)胞表面2次。懸浮細(xì)胞、貼壁不牢的細(xì)胞、半貼半懸細(xì)胞換液或傳代前，可利用支原體直徑遠(yuǎn)小于細(xì)胞直徑的特點(diǎn)，采用150 g（或900 rpm）低速離心5mins，棄去舊的培養(yǎng)基，再用含1000×支原體高效清除劑的PBS輕輕沖洗細(xì)胞2次；

⑥用含藥PBS清洗細(xì)胞后，加入含有支原體高效清除試劑的新鮮培養(yǎng)基（傳代后鋪細(xì)胞需更換為新的瓶/板），1天換液1次， 連續(xù)加藥4~7天，或者2天換液1次，連續(xù)加藥7~14天，若細(xì)胞污染非常嚴(yán)重時，需增加換液頻率和延長處理時間；

⑦若細(xì)胞污染嚴(yán)重，且需要快速清除支原體時，即可采用高濃度藥物（500×~1000×）進(jìn)行清除，傳代后，為了防止藥物影響細(xì)胞貼壁，建議待大部分細(xì)胞貼壁后再加入藥物，即先用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，鋪瓶，0.5~2h后在培養(yǎng)基中加入對應(yīng)稀釋倍數(shù)的支原體高效清除劑，輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

⑧在添加了本試劑的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)1~2周后，推薦使用支原體PCR檢測試劑盒（貨號: MD01-001）判斷是否還存在支原體污染。

⑨本試劑可以有效抑制或去除多種支原體，但并不能確保可以去除實(shí)際實(shí)驗(yàn)操作過程中遇到的任何類型的支原體。由于細(xì)胞可能會污染多種支原體，如遇污染極其特殊的支原體類型，可先用支原體高效清除劑處理1~2周后，使用支原體清除試劑Plus進(jìn)行后續(xù)1~2周的支原體清除處理，2~3周后即可清除全部支原體。

⑩如遇個別細(xì)胞對本試劑敏感，細(xì)胞生長速度明顯受影響時，建議減量使用或進(jìn)行稀釋度測試；

?支原體高效清除劑處理后，會有很好的預(yù)防和清除效果，但是如果環(huán)境或使用試劑中仍有污染源存在，細(xì)胞可能會再次污染，因此需做好適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施
?加入本產(chǎn)品進(jìn)行支原體預(yù)防和清除時，無需添加雙抗（青霉素-鏈霉素）；

?為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

?本產(chǎn)品僅供研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不得用于診斷或治療。