諾博萊德 DAB法顯色試劑盒 顯色與信號檢測

NobleRyder  SW9818  DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產品貨號：SW9818

產品名稱：DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產品規格：1盒

產品簡介：

英文名稱：Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中文名稱：DAB法顯色試劑盒（山羊IgG）

規格：1盒

儲存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

保存：

-20℃避光密閉保存，一年有效。若經常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 20 倍 DAB 顯色液B 存放于 2-8℃以方便使用。

產品簡介：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質按照分子量大小分離，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，經過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。

操作步驟：(僅供參考)

常規電泳轉膜后:

1) 清洗轉印膜：將膜剝離下后，作好標記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min, 以盡量洗去轉印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結合。

2) 按 5g 封閉試劑加100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉印膜，封閉液內，搖床震動，室溫封閉 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水，混勻，可 4℃ 保存三個月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二 天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標記，分開孵育。

5) 用 TBS-T，PH7.6洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

6) 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 1-2ul HRP 標記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。

7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 10min。

8) 配制 DAB 顯色：根據用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 顯色液 A、DAB 顯色液 B 各200ul，混勻，加 在膜正面，室溫下顯色。在目標條帶顯出后，而且背景未出時，放入水中終止顯色。

注意事項：

1. 請根據一抗來源選擇試劑盒。

2. western blotting DAB 顯色法操作簡單，但其敏感性與 ECL 發光發有一定的差距，一般只適用于豐 度較高的蛋白。

3. 可以根據顯色結果來優化實驗反應時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長最終漂洗次數與 時間。如果條帶過弱，可延長抗體孵育時間。

4. 如果wan全沒有條帶，請檢查前期蛋白處理及實驗過程， 如果確認無誤，反復兩次依舊無結果， 請換用 ECL 發光法顯色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調 PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可。（也可按照自己的配制習慣來配制）

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