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微生物培養基:成分解析與常用配方實踐指南

閱讀:544      發布時間:2024-4-30
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引言

微生物的世界豐富多彩,其研究與應用深入醫藥、工業、環保等諸多領域。要揭示微生物的生命奧秘并調控其生長行為,首要任務便是為其提供適宜的生存環境,即精心調配的培養基。培養基猶如微生物的“營養餐",其成分各異,功能多樣,共同構建出滿足不同微生物生長需求的微生態“家園"。本文將詳細解析各類菌種培養基的組成成分及其作用,并列舉若干常用培養基的具體配方與應用,旨在為微生物學研究者提供全面的理論指導與實踐參考。


菌種培養基成分解析

菌種培養基包含了各種微生物(包括細菌、酵母菌、霉菌和乳酸菌)培養所需的多種成分。不同成分的作用如下:

蛋白胨/牛肉膏/牛肉浸粉/酵母膏/酵母浸粉/酪蛋白胨/胰蛋白胨/大豆胨:這些都是氮源和氨基酸的來源,提供微生物生長所需的必需和非必需氨基酸,以及部分維生素和生長因子。它們對于細胞代謝、蛋白質合成和細胞增殖至關重要。

麥芽浸粉/馬鈴薯浸粉:作為碳源,提供微生物生長所需的能量和碳骨架,主要供微生物合成細胞物質和代謝產物。麥芽浸粉還含有豐富的麥芽糖、糊精等易被微生物利用的碳水化合物。

葡萄糖:是最直接的能源物質,可迅速被微生物代謝產生能量(ATP),支持細胞生長和代謝活動。

氯化鈉/硫酸鎂/MgSO4·7H2O/KH2PO4/磷酸氫二鉀/磷酸二氫鉀/氯化鈣:這些無機鹽和礦物質元素作為微生物生長必需的微量元素,參與酶活性調節、維持滲透壓平衡、穩定細胞膜結構以及參與某些生化反應(如磷酸化反應)。

硫酸錳/硫胺素/半胱氨酸鹽酸鹽:特定的維生素和微量元素,滿足特定微生物的特殊營養需求,如硫胺素(維生素B1)對于酵母和某些細菌的生長有利,半胱氨酸鹽酸鹽作為還原劑和硫源,對某些微生物的生長有利。

瓊脂:作為凝固劑,用于制備固體培養基。它在冷卻后形成穩定的凝膠結構,便于微生物的接種、觀察和計數。

吐溫80:作為非離子表面活性劑,能降低培養基的表面張力,提高營養成分的溶解度,有助于乳酸菌的生長和增殖。

乙酸鈉/檸檬酸二銨:有機酸鹽,作為緩沖體系的一部分,維持培養基的pH穩定,為微生物提供適宜的生長環境。

氯霉素:作為選擇性抑菌劑,抑制細菌生長,有利于霉菌和酵母菌的增菌培養。

特殊蛋白胨/可溶性淀粉:特殊蛋白胨提供豐富營養,可溶性淀粉作為碳源,同時該培養基含有的血液成分(如血紅蛋白)可作為某些需血細菌的生長因子。

無菌脫纖維綿羊血:用于觀察細菌的溶血現象,有助于細菌分類鑒定。

維生素K1溶液/氯化血紅素溶液:提供特定微生物生長所需的維生素和生長因子。

總結起來,這些成分在培養基中各自發揮著提供碳源、氮源、能源、生長因子、微量元素、緩沖體系、凝固劑、抑菌劑、表面活性劑等作用,共同構建出能滿足不同微生物生長需求的營養環境。根據目標微生物的特性,選擇或設計合適的培養基配方,有助于優化微生物的生長狀況和實驗結果。


常用菌種培養基

1、營養瓊脂培養基

成分含量
蛋白胨10.0 g
牛肉膏3.0 g
氯化鈉5.0 g
瓊脂15.0 g
pH7.3 ± 0.1 (25℃)

使用方法:稱取上述成份33.0g于1L蒸餾水或去離子水中(可按比例增加或減少配制量),加熱煮沸至溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘或115℃滅菌30分鐘,滅菌結束后請搖勻,以防瓊脂沉積于器皿底部而凝固,備用

主要用途:細菌計數、不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用(GB標準)

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875002


2、麥芽汁瓊脂培養基

成分含量
麥芽浸粉130.0 g
氯霉素0.1 g
瓊脂15.0 g
pH6.0±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分145.1g于1L蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸持續1分鐘以上使溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,傾注平板,備用

主要用途:用于霉菌和酵母菌增菌培養

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875063


3、MRS瓊脂培養基

成分含量
蛋白胨10.0 g
牛肉浸粉8.0 g
酵母粉4.0 g
葡萄糖20.0 g
硫酸鎂0.2 g
乙酸鈉5.0 g
檸檬酸二銨2.0 g
磷酸氫二鉀2.0 g
硫酸錳0.04 g
吐溫801.0 g
瓊脂14.0 g
pH5.7±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分66.24g于1L蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸持續1分鐘以上使溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,搖勻,傾注平板,冷卻,備用

主要用途:乳酸菌培養及計數

保存說明:2-8℃保存

相關資源:HZB875009


4、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基

成分含量
馬鈴薯浸粉6.0 g
葡萄糖20.0 g
瓊脂20.0 g
pH5.6±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分46.0g于1L蒸餾水或去離子水中,微溫溶解,分裝,115℃滅菌30分鐘,滅菌結束后請搖勻,以防瓊脂沉積于器皿底部而凝固,冷至50℃左右,傾注平皿,備用

主要用途:霉菌,酵母菌培養及計數

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875012


5、綜合馬鈴薯瓊脂培養基

成分含量
馬鈴薯浸粉10.0 g
葡萄糖20.0 g
KH2PO43.0 g
MgSO4·7H2O1.5 g
硫胺素0.008 g
瓊脂15.0 g
pH6.0±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分49.6g于1L蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸至溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘或115℃高壓滅菌30分鐘,滅菌結束后請搖勻,以防瓊脂沉積于器皿底部而凝固,備用。因含馬鈴薯粉而呈白色不透明狀態

主要用途:真菌的分離培養

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875004


6、哥倫比亞血瓊脂培養基

成分含量
特殊蛋白胨23.0 g
可溶性淀粉1.0 g
氯化鈉5.0 g
瓊脂10.0 g
pH7.3±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分39.0g于1L蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸持續沸騰1分以上使溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至45~50℃,無菌操作每100ml培養基加入5ml預熱的無菌脫纖維綿羊血,輕輕搖勻,傾注平板

主要用途:用于營養需求比較高細菌培養,分離,溶血實驗

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875001


7、YM瓊脂培養基

成分含量
酵母浸粉3.0 g
麥芽提取物3.0 g
葡萄糖10.0 g
酪蛋白胨5.0 g
瓊脂20.0 g
pH6.2±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分41.0g于1L蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸至溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,滅菌結束后請搖勻,以防止瓊脂沉積于器皿底部而凝固,備用

主要用途:霉菌、酵母菌的分離培養

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875006


8、LB瓊脂培養基

成分含量
酵母膏5.0 g
蛋白胨10.0 g
氯化鈉10.0 g
瓊脂15.0 g
pH7.0±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分40.0g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘,烘干后轉移至超凈工作臺制作成平板

主要用途:細菌增菌培養

保存說明:室溫、避光、干燥

相關資源:HZB875007


9、胰蛋白胨大豆液體培養基

成分含量
胰蛋白胨17.0 g
大豆胨3.0 g
氯化鈉5.0 g
磷酸氫二鉀2.5 g
葡萄糖2.5 g
pH7.3±0.2(25℃)

使用方法:稱取上述成分40.0g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘,烘干后轉移至超凈工作臺制作成平板

主要用途:一種通用的營養培養基,用于各種微生物的培養,也可用于阪崎腸桿菌的純化培養和產黃色素試驗

保存說明:2-8℃保存

相關資源:HZB875005


10、PYG液體培養基

成分含量
蛋白胨20.0 g
葡萄糖5.0 g
酵母浸粉10.0 g
氯化鈉0.08 g
半胱氨酸鹽酸鹽0.5 g
氯化鈣0.008 g
硫酸鎂0.008 g
磷酸氫二鉀0.04 g
磷酸二氫鉀0.04 g
碳酸氫鈉0.4 g
pH6.0±0.1(25℃)

使用方法:稱取上述成分 18.04g,加熱溶解于500ml 蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至 50℃左右時,加入過濾除菌的維生素 K1溶液 0.5ml 和氯化血紅素溶液(5mg/ml ) 2.5ml,混勻,備用

主要用途:用于細菌的培養

保存說明:2-8℃保存

相關資源:HZB875047


總結

培養基是微生物研究與應用的核心工具,其精確配方關乎微生物的生長性能與實驗結果。文中詳述了培養基中的氮源、碳源、能源、生長因子、微量元素、緩沖體系、凝固劑、抑菌劑、表面活性劑等多元成分,闡述了各成分對微生物生長代謝的重要影響。隨后列舉的十種常用培養基,如營養瓊脂、麥芽汁瓊脂、MRS瓊脂等,不僅展示了其特定成分與用量,還明確了適用對象、制備方法與儲存條件,為實際操作提供了清晰指南。綜上,理解并合理選用培養基,既是揭示微生物生命活動的基礎,也是推動微生物技術發展的關鍵。


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更新日期:2024-04-30


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