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細胞名稱:Ls-174-T人結腸腺癌細胞ATCC
細胞代次:P4
細胞規格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)
細胞凍存:無血清凍存液
細胞傳代:第一次建議1:2
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據,不提供照片默認收到狀態良好。(注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養基,另外一瓶用自己配的培養基,以便進行對比培養)
培養前的工作準備充分
包括耗材的處理、試劑的配置,無菌檢驗等等。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿(細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青m素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,160℃ 干烤 2 h 待用。
試劑配置。細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調節。
無菌檢驗。主要采用過濾除菌:如抗生素、G-418 溶液、各類培養基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌,如 PBS、D-Hank's等。
試劑分裝保存
包括營養液、血清等。
血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃,如果一次無法用完一瓶,可將 40~50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌,不需再無菌過濾。若發現血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養基內一起過濾,勿直接過濾血清。(一般情況下不影響細胞培養)
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。
熱滅活是指 56℃,30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后,將血清放入,待溫度升高到 56℃ 后計時,一般 5 分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。
注意事項:有些細胞比較特殊,如貼壁不牢,在運輸過程中發生容易細胞脫落,這是正常現象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(后期對比培養),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養基終止反應。再離心,棄上清,加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的培養基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
YS1133P小鼠骨髓來源巨噬原代細胞
YS1134P小鼠皮層神經元原代細胞
YS1135P小鼠嗅球神經元原代細胞
YS1136P小鼠椎間盤髓核原代細胞
YS1137P小鼠胸腺上皮原代細胞
YS1138P小鼠骨髓樹突狀原代細胞(DC原代細胞)
YS1139P小鼠肺泡巨噬原代細胞
YS1140P小鼠脾淋巴原代細胞
YS1141P小鼠角膜基質原代細胞
YS1142P小鼠神經星形膠質原代細胞
YS1143P小鼠支氣管平滑肌原代細胞
YS1144P小鼠結腸黏膜上皮原代細胞
YS1145P小鼠脊髓成纖維原代細胞
YS1146P小鼠背根神經元原代細胞
YS1147P小鼠表皮成纖維原代細胞
YS1148P小鼠表皮角化原代細胞
YS1149P小鼠腹膜間皮原代細胞
YS1150P小鼠骨內膜間充質干原代細胞
YS1151P小鼠海綿體內皮原代細胞
YS1152P小鼠骺軟骨原代細胞
YS1153P小鼠呼吸道上皮原代細胞
YS1154P小鼠肌腱干原代細胞
YS1155P小鼠肌源性干原代細胞
YS1156P小鼠脊髓神經元原代細胞
YS1157P小鼠角膜內皮原代細胞
YS1158P小鼠淋巴結淋巴原代細胞
YS1159P小鼠胚肺成纖維原代細胞
YS1160P小鼠前列腺成纖維原代細胞
YS1161P小鼠乳腺成纖維原代細胞
YS1162P小鼠視乳頭星形膠質原代細胞
YS1163P小鼠微血管周原代細胞
YS1164P小鼠胸腺淋巴原代細胞
YS1165P小鼠牙齦上皮原代細胞
YS1166P小鼠牙周膜成纖維原代細胞
YS1167P小鼠真皮微血管內皮原代細胞
YS1168P小鼠脂肪干原代細胞
YS1169P小鼠椎間盤纖維環原代細胞
YS1170P小鼠卵泡膜原代細胞
YS1171P小鼠骨骼肌衛星原代細胞
YS1172P小鼠多巴胺神經元原代細胞
YS1173P小鼠子宮內膜基質原代細胞
YS1174P小鼠腎小球上皮原代細胞
YS1175P小鼠全骨髓原代細胞
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