凝膠色譜凈化系統,特別是凝膠滲透色譜(GPC)系統,在現代分析化學、生物化學及環境監測等領域中扮演著至關重要的角色,利用多孔凝膠作為固定相,根據分子大小的差異對樣品進行分離。大分子物質由于無法進入凝膠孔隙而先流出,小分子物質則進入孔隙并后流出,從而實現不同大小分子的有效分離。這種分離機制對于去除樣品中的大分子雜質,如蛋白質、多糖等,以及富集目標小分子化合物,如藥物活性成分、環境污染物等,具有重要意義。
凝膠色譜凈化系統的測定步驟:
1.樣品準備:將待測樣品溶解在適量的溶劑中,使其濃度達到適合測定的范圍。溶液中的固體顆粒應盡量去除,可通過過濾或離心操作來完成。
2.儀器檢查:打開儀器電源,啟動GPC系統。檢查儀器各個部分的連接是否緊密,確保沒有泄漏。檢查流動相的質量和純度,必要時進行更換。
3.設置參數:根據樣品的特性和需要選擇合適的洗脫緩沖液,并將其冷藏備用。設置流動相的流速和溫度,一般情況下,流速根據實驗需要選擇,溫度一般設置在室溫下進行。
4.樣品注入:使用適當的毛細管或注射器將樣品注入到色譜柱中。
5.開始運行:開始運行GPC實驗,記錄運行開始的時間。設定好GPC柱的溫度、流速和檢測器的靈敏度等參數。打開檢測器的電源,選擇合適的檢測波長或檢測器類型。
6.數據記錄:開始樣品分離,記錄分離過程中的響應信號,并保存數據。
7.數據處理:使用專用的GPC數據處理軟件對得到的數據進行處理。根據響應信號與時間的關系曲線,計算出不同分子量的聚合物峰面積。將樣品的峰面積與標準聚合物的峰面積進行比較,計算出待測樣品的分子量分布。
8.結果輸出:根據實驗需要,可以生成相關的分子量分布曲線或分子量平均值等結果。
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