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重組腺病毒載體快速檢測試劑盒

一、原理

重組腺病毒（rAdv）載體是目前用于基因傳遞、體液和細胞免疫研究的載體之一。包裝腺病毒以及腺病毒擴增均需要進行腺病毒復制效率的評價，通常方法是 TCID50測定、核酸雜交、實時熒光定量 PCR、SDS-PAGE 電泳等。重組腺病毒六鄰體蛋白快速檢測卡提供了一種可以在實驗當中對腺病毒載體進行快速檢測的方法。其原理是基于膠體金側向層析技術的蛋白半定量檢測，其主要結構由層析膜、樣品墊、金標墊、吸水紙、背板等組成。在層析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗體（質控線）和腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體（檢測線）；在金標墊上固定有膠體金標記的另外一株腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體。當待測樣品滴加到樣品墊時，通過毛細作用，液體向金標墊移動。當液體通過金標墊時，樣品中含有的腺病毒即與膠體金標記的單克隆抗體結合，形成病毒金標抗體復合物，當復合物移動到檢測線時，被固定在檢測線上的腺病毒抗體所捕獲。隨著被捕獲的復合物的堆積，在檢測線上呈現出紫紅色條帶。當復合物移動到質控線時，羊抗鼠多抗捕獲膠體金標記的鼠單克隆抗體，在質控線上呈現出紫紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測線和質控線是否顯色，即可判斷樣品中是否存在重組腺病毒。本檢測卡的檢測下限為108vp/ml，在108-1010vp/ml 的檢測范圍內，隨腺病毒濃度提高，檢測線條帶的顯色逐漸增強，腺病毒濃度與檢測線條帶強度呈現正相關。該檢測卡可以識別包括腺病毒3、5、7、11、40、41型等多種亞型。

重組腺病毒載體快速檢測試劑盒

二、用途

5型重組腺病毒包裝或擴增時的病毒滴度快速評估重組腺病毒載體效價評估方法有基于細胞病變的 TCID50測定、核酸雜交、實時熒光定量 PCR、SDS-PAGE 電泳等。這些方法均耗時耗力，并且成本高昂。與上述方法相比，腺病毒快速檢測卡使用簡便，檢測時間短，可以隨時對轉染、收毒、擴增、純化效果進行評估。如在更換培養基時，吸取樣品滴加到檢測卡上，10~15min 后即可判讀結果。因此，使用該快速檢測卡，可以快速評估轉染效果，減少不必要的時間和試劑浪費。

三、組成

1）檢測卡；2） 稀釋液； 3）說明書

四、使用方法

1.打開包裝取出檢測卡，平放在生物安全柜臺面上；

2.用微量移液器吸取 20μl 細胞培養上清等，滴加到樣品窗（S）中；再加入 50μl 緩沖液；

3.室溫靜置10-15min后即可判讀結果。

五、結果判斷

1.在檢測窗中，質控線（C）和檢測線（T）均顯色即為陽性；

2.質控線（C）顯色，檢測線（T）不顯色，檢測結果為陰性；

3.質控線（C）不顯色，無論檢測線（T）是否顯色，檢測無效。