目錄:柏萊源（天津）生物科技有限公司>>生物試劑>>試劑盒kit>> HG-TA001人腫瘤壞死因子(TNF-α)ELISA 檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業,制藥/生物制藥 |
貨號：HG-TA001
本試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫檢測(ELISA)法，將人TNF-a標準品和待測樣本加入預包被抗人 TNF-a抗體的酶標板，然后加入稀釋后的生物i素標記的人 TNF-a檢測抗體，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體-Biotin+ SA-HRP 復合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色。TMB 在 HRP酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液的作用下最終轉化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的人 TNF-α 的量呈正相關。
檢測范圍: 1.37~1000pg/mL
靈敏度:0.21 pg/mL
96T
適用于生物制品純化工藝過程的優化、中間工藝過程的雜質控制以及終產品的放行檢測。
| 組分 | 規格 | 配制 |
| 標準品Standard(S,S1~S7,S0) | 300μLx9管 | S0~S7即用型， S按建議稀釋方式操作 |
| 包被酶標板Coated Plate | 8孔×12條 | 即用型 |
| 檢測緩沖液Assay Buffer | 12mL×1瓶 | 即用型 |
| 濃縮洗液Wash Buffer(10×) | 50 mL×1瓶 | 用超純水進行10倍稀釋 |
| 檢測抗體Detection Antibody | 6mL x1瓶 | 即用型 |
| 酶結合物Streptavidin-HRP | 12mL x1瓶 | 即用型 |
| TMB顯色液TMB Substrate | 12mL×1瓶 | 即用型 |
| 終止液Stop Solution | 12mL×1瓶 | 即用型 |
| 封板膜Sealing film | 5張 | 即用型 |
| 說明書 | 1份 | 即用型 |
備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月。
◆酶標儀
◆去離子水
◆恒溫培養箱
◆全新濾紙
◆微量移液器及吸頭
◆渦旋振蕩器
實驗前準備
1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫(18~25°C)。所有試劑現配現用。
2.1x 洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18-25℃），不要有結晶。混勻后根據用量，取適量用超純水按1：9的比例，將10x洗液稀釋10倍，最終得到1x洗液。
3.標準品的配制:
S1至 S7 和 S0 用于血清和血漿。
其他類型樣本，用緩沖液(SPB,樣品基質)制備標準曲線，例如細胞培養上清液、組織研磨液、細胞裂解物等。尿樣使用AB(檢測緩沖液)制備標準曲線。
人TNFa標準品S(10000pg/mL)30μL+270μLSPB作為高標準(1000 pg/mL)，每個稀釋試管中加入 200 μLSPB,使用高標準品按 1:2 梯度稀釋。每一步稀釋必須充分混勻。SPB用作零標準(0pg/mL)。
操作步驟
使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫(18~25°C)。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。
1.試劑準備:提前準備好各種待測試劑、稀釋好的標準品和待測樣本。
2.酶標板條確定：計算待測樣本和標準品所需酶標板條，將酶標條從鋁箔袋取出，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。
3.每孔加入 50uL 檢測緩沖液。
4.樣本及檢測抗體孵育：每孔加入50 μL標準品和待測樣本，確保15 min內完成點樣。再向每孔加入50 μL 檢測抗體。用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉/分鐘、25℃孵育1小時。
5.洗板：棄去孔中液體，加入1×洗液（300 μL/孔）洗板4次，拍干酶標板中殘留液體。
6.酶結合物孵育：將酶結合物加入酶標板中，100 μL/孔，用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉/分鐘、25℃孵育30分鐘。
7.洗板:同步驟 5。
8.每孔加入100 μL顯色底物TMB，室溫（18-25℃）孵育15~20分鐘。
9.終止:每孔加入 100 uL終止液，輕輕震動酶標板至顯色均勻。
10.讀值:20 min 內讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長，630nm 作為參比波長。
結果處理
1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）
| 標準品濃度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
| 1000.00 | 4.3651 | 4.1387 | 4.2519 |
| 333.33 | 2.4084 | 2.3694 | 2.3889 |
| 111.1l | 0.9071 | 0.9969 | 0.9520 |
| 37.04 | 0.3960 | 0.3896 | 0.3908 |
| 12.35 | 0.1693 | 0.1712 | 0.1703 |
| 4.12 | 0.0819 | 0.0885 | 0.0852 |
| 1.37 | 0.0588 | 0.0628 | 0.0608 |
| 0.00 | 0.0390 | 0.0402 | 0.0396 |
2. 標準品理論濃度與對應 OD 值以四參數進行擬合，得到標準曲線(如下圖所示)。
1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續倍數的稀釋，以在標準曲線范圍內產生至少一個稀釋后樣品。
2.試劑按標簽說明儲存，使用前室溫(18-25°C)平衡。
3.包被酶標板使用前，請平衡至室溫(18-25°C)再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月其余不用試劑應包裝好或蓋好。
4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5.使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。
6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙中上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。
7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。
8.本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。
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