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蘇州珀羅汀生物技術有限公...

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CFPS攻無不克 膜蛋白難題迎刃而解

閱讀:337      發布時間:2024-9-10
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膜蛋白在細胞的物質運輸、信號轉導、增殖分化等許多生命活動中起著非常重要的作用,是重要的藥物靶點。然而,由于表達量低、構象不穩定、難分離純化等原因,許多研究受限于膜蛋白難表達而止步不前。

山東農業大學某課題組就遇到這樣一個難題:某膜蛋白用原核體系難以表達,經過兩年時間反復嘗試,仍未攻克難關。

珀羅汀生物基于自主研發的無細胞蛋白表達(CFPS)系統,已成功表達多例全長跨膜蛋白。該課題組慕名而來,在進一步了解CFPS技術以及珀羅汀生物在無細胞領域的技術優勢之后,決定委托珀羅汀生物,利用CFPS平臺嘗試表達該膜蛋白。


測試方法


收到客戶質粒后,珀羅汀生物研發人員立即著手構建線性表達模板,為了直接觀測目標膜蛋白的表達情況并提高其可溶性,研發人員還構建了融合GFP的表達模板。隨后,采用專研的針對膜蛋白的CFPS體系(即PLDK002試劑盒來源體系),并添加去垢劑【1】,于收到質粒當天完成無細胞反應體系構建。

實驗設計:

組別

NC

A1

A2

B1

B2

是否融合GFP

-

-

-

+

+

是否添加去垢劑

-

-

+

-

+

純化標簽

-

His標簽


注:【1】該去垢劑是依據珀羅汀生物膜蛋白表達案例庫的實驗數據選出。


測試結果


CFPS攻無不克 膜蛋白難題迎刃而解

圖1融合GFP的目標膜蛋白在照膠儀下發出綠色熒光


次日,取反應后上清,進行親和純化、表達鑒定。如圖1所示,B1、B2兩組在照膠儀下均發出綠色熒光,提示融合GFP的目標膜蛋白無論是否添加去垢劑,均可在CFPS體系的上清液中可溶表達!


CFPS攻無不克 膜蛋白難題迎刃而解


圖2 目標膜蛋白SDS-PAGE結果圖



經考染、脫色后,如圖2所示,未融合GFP的目標膜蛋白(A1、A2組)同樣在上清液中可溶表達!此外,分別對比A1、A2組與B1、B2組可以發現,添加去垢劑可促進該膜蛋白的可溶表達。


總結


珀羅汀CFPS系統不負眾望,兩天之內,成功表達了困擾該課題組長達兩年的膜蛋白,“難表達蛋白的救星"名副其實!本次實驗的成功,再次顯示出珀羅汀CFPS技術在膜蛋白等難度蛋白表達領域中的絕倫。






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