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VELP漩渦混勻器在染色體標本的FISH技術的應用

閱讀:680      發布時間:2015-2-4
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實驗目的

  1.掌握FISH技術的一般原理,及其基本實驗方法; 

  2.了解FISH技術的發展概況,以及應用范圍。


實驗原理

FISH是以分子雜交為基礎,應用非放射性熒光物質標記核酸探針,通過堿基互補的原理與靶DNA雜交,在核中或染色體上顯示靶DNA序列位置的方法。FISH技術可分為四個步驟:樣品制備、探針標記、雜交及其檢測。


實驗準備

  1.材料染色體標本或血涂片

  2.儀器低溫高速離心機、熒光顯微鏡、VELP漩渦混勻器、移液器、恒溫水浴鍋、培養箱、烤箱


實驗方法與步驟  

   1.探針混合與變性

  (1)混合20~60ng標記探針DNA和3~5μg鮭精DNA。反應后體積少于10μl,可直接凍干;若體積較大,可加1/20體積的3mol/L乙酸鈉和2倍體積100%乙醇沉淀DNA。混勻并于-70℃30min。在4℃,12000r/min離心10min,棄上清,沉淀物以300μl70%乙醇洗滌后在離心(同上),棄上清,凍干。

  (2)將DNA重懸于5μl去離子的甲酰胺中,室溫旋渦混勻3min。

  (3)加入5μl雜交緩沖液,漩渦混勻器中混勻5min。

  (4)將DNA探針置于75℃水浴中變性5min。迅速置于冰浴中5min,備用。 

   2.樣本處理

    意大利VELP推出了創新性紅外感應漩渦混合器,紅外傳感是VELP創新性的產品。VELP紅外感應漩渦混合器,一旦檢測到試管,VELP漩渦混合器自動開始震動,不需要施加任何外力,而且相比于傳統的接觸模式,VELP紅外傳感漩渦混合器能確保在震動減少過程的急劇變化。VELP漩渦混合器確保了樣品的穩定性。VELP漩渦混合器zui大轉速可以達到3000rpm,VELP漩渦混合器可以滿足大部分實驗室的需求。VELP漩渦混合器技術紅外感應震動可以在實驗中解放您的雙手,讓實驗更快捷、更準確!

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