菌落PCR(ColonyPCR)可不必提取目的基因DNA,不必酶切鑒定,而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增,省時少力。建議使用載體上的通用引物來篩選陽性克隆。通常利用此pcr的方法進行篩選插入的目的基因或者DNA測序分析。zui后的PCR產物大小是載體通用引物之間的片斷大小。
菌落PCR與我們通常的普通DNA的PCR的不同在于,菌落pcr直接以單個菌作為模板。是一種可以快速鑒定菌落是否為含有目的基因的陽性菌落。操作簡單,快捷,靈敏度高,是有別于酶切驗證的方法。
菌落PCR的制備方法
1.菌落PCR DNA的制備:
挑取新鮮單菌落置于 30μl 0.2%SDS 中;velp漩渦混合器上混勻15 秒;90℃熱激4min;4℃ 13000rpm×1min,離心,取上清液20μL 至新的無菌離心管中,-20℃保藏。
2.菌落PCR的制備
挑取新鮮單菌落置于 20μl 水中;velp漩渦混合器上混勻15 秒;取5μl 作為PCR模板,剩余菌液放-20℃保藏。
對于菌落PCR實驗室的實驗員來說,一天的樣品的制備量非常大,選擇一款快捷、省力的漩渦混合器十分必要。同時選擇一款穩定、的漩渦混合器也備顯重要。
意大利VELP推出了創新性紅外感應漩渦混合器,紅外傳感是VELP創新性的產品。VELP紅外感應漩渦混合器,一旦檢測到試管,VELP漩渦混合器自動開始震動,不需要施加任何外力,而且相比于傳統的接觸模式,VELP紅外傳感漩渦混合器能確保在震動減少過程的急劇變化。VELP漩渦混合器確保了樣品的穩定性。VELP漩渦混合器zui大轉速可以達到3000rpm,VELP漩渦混合器可以滿足大部分實驗室的需求。VELP漩渦混合器技術紅外感應震動可以在實驗中解放您的雙手,讓實驗更快捷、更準確!
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