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1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。

2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、熒光或放射性標記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號。后利用信號強度，標準樣品濃度梯度等信息計算得出待測樣中目標抗原的濃度。

3.分類：根據免疫識別和信號輸出方式的不同，ELISA可以分為雙抗體夾心法、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等。其中雙抗體夾心法在商業應用上常見。

大鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒注意事項：

1.所有的操作過程一般都用排槍處理，在操作過程中，排槍吸兩檔打一檔，會防止氣泡的產生，并且操作時一定要保證槍頭每步都要插緊，選擇配套的槍頭尤為重要，槍頭容易掉，影響實驗效果，此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊，避免槍頭松動自己卻不知。

2.在處理稀釋標準品的過程中，要在渦旋儀上點一下，使混勻，但振蕩過程不宜過長，防止出現蛋白質降解變性的現象

3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關重要的作用，每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個預實驗，設置不同的二抗濃度和顯色時間，從而確定相應的條件，方可做好大規模的篩選細胞工作。

4.同種細胞株的ELISA孵育時間要保持一致，降低無關變量的影響。

5.各種抗體的保存是在-80度冰箱，一定要將降低凍融次數，蛋白比較敏感，凍融次數多，蛋白活性就會降低。

6.稀釋樣品時一定要保證混勻，槍尖在液面以下吹打相同的次數，可防止出現氣泡。

7.分析數據的過程中，一般至少要5個點，不然數據沒有相應的說服力。

8.96孔板取完樣品后，蓋好，提早加好DPBS稀釋液，防止時間過長，樣品揮發，濃度不準。
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