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為度生物 | 親和層析介質選擇指南
親和層析是基于生物分子與其他配基分子之間（如抗原與抗體、酶與底物、激素與受體、核酸中的互補鏈、多糖與蛋白復合體等）的特異性吸附原理建立和發展起來的。通過介質上的配基與目標分子之間的特異性吸附來實現純化目標分子的目的。由于這種特異性的作用力，親和層析具有高度選擇性、高活性回收等特點。
抗體純化
將Protein A和Protein G等物質偶聯在高強度交聯瓊脂糖上，廣泛用于抗體的純化。
抗體純化工藝過程
抗體純化親和介質列表
應用案例
質粒DNA純化
Plasmid系列填料純化原理是利用配基的嗜硫吸附，適用于分離純化閉環的超螺旋質粒DNA。
質粒DNA純化親和介質列表
His標簽蛋白純化
過渡態金屬離子 （Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+）能夠與電子供體，如N、S、O等原子以配位鍵結合，金屬離子上剩余的空軌道是電子供體的配位點，在溶液中會被水分子或陰離子占據，當蛋白質表面氨基酸殘基（His）與金屬離子的結合力較強時，氨基酸殘基的供電原子就會與金屬離子結合形成復合物，取代原先結合的水分子或陰離子，這樣就能使蛋白質分子結合在固體表面。His標簽蛋白的His和介質結合，由于蛋白質表面的氨基酸的種類、數量、位置和空間構象不同，因而具體使用時根據金屬配基的親和力大小不同，選擇不同的金屬配基進行分離純化。
★螯合離子（和His結合力）Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+，其中：Cu2+結合力強，Ni2+最'常用，Co2+結合力較弱而分辨率高。
His標簽蛋白純化親和介質
His標簽蛋白純化親和介質是將金屬離子（Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+）螯合在高強度交聯的瓊脂糖上制備而成的親和介質。根據螯合方式不同，又分為IDA,IMAC,TED三種。
His標簽蛋白純化親和介質對比
His標簽蛋白純化親和介質列表
應用案例
His標簽蛋白純化親和介質的清洗
His標簽蛋白純化親和介質常見問題
（1）His標簽蛋白不和介質結合
可能原因a：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化；太小，蛋白沒有全部釋放）
解決方法：改變超聲功率或采用其它方法破碎細胞
可能原因b：樣品或緩沖液不合適
解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高
可能原因c：His標簽暴露不完全
解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質純化
可能原因d：His標簽丟失
解決方法：必要時增加His的個數并確保正確表達，同時降低上樣速度，確保足夠的孵育時間
（2）His標簽蛋白結合在介質上洗脫困難
可能原因a：洗脫條件太溫和
解決方法：增加洗脫咪唑濃度或降低pH
可能原因b：蛋白沉積在介質上
解決方法：減少上樣量，優化層析條件
可能原因c：非特異性結合
解決方法：緩沖液加2% Triton X-100和NaCl
（3）洗脫峰雜質多
可能原因：非特異性結合，清洗不徹'底，降解等
解決方法：純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹'底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結合
（4）使用幾次，介質結合效率降低，柱效降低
可能原因：介質上沉積大量雜質等
解決方法：徹'底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理
GST標簽蛋白純化
GST（谷胱甘肽轉移酶）能特異的與谷胱甘肽結合，表現為酶和底物的作用原理，利用這個原理，將GST做成標簽表達出融合蛋白，與谷胱甘肽配基的親和介質特異性結合，從而純化出目標蛋白。GST融合蛋白純化的特點是：純度高，純化條件溫和保持蛋白活性，促進蛋白可溶性表達等。
GST標簽蛋白純化親和介質列表
應用案例
絲氨酸蛋白酶純化
絲氨酸蛋白酶純化親和介質，是將絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑對氨基苯甲醚偶聯在瓊脂糖微球Focurose FF和高強度交聯的瓊脂糖Focurose4FF制備而成，稱為Benzamidine Focurose FF(LS)和Benzamidine Focurose 4FF(HS)。
絲氨酸蛋白酶純化親和介質列表
肝素親和介質
肝素親和介質列表
病毒，病毒/微生物抗原純化
PS Focurose HPL是一種特定的親和填料，適用于部分病毒、病毒樣顆粒以及某些特定的抗原和蛋白的親和層析純化。
病毒，病毒/微生物抗原純化親和介質列表
PS Focurose HPL適用性
預活化介質
預活化介質也稱為親和介質活化中間體，是在各種交聯強度瓊脂糖的基礎上，通過不同的偶聯方法鍵合上不同的活性基團（活性間隔臂）。通過活性基團可進一步偶聯各種配基，用于制備其它介質（主要是親和介質）及固定相應物質，用戶可根據自己需求把待偶聯的配基很容易地偶聯上去，避免了前期接活性基團的繁瑣工序。
預活化介質列表
應用案例
預活化介質的特點
★CNBr Focurose 4FF應用廣泛，無需偶聯間隔臂，直接偶聯各種帶氨基的生物大分子，多位點偶聯，簡單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學活性及穩定性。
★NHS Focurose 4FF易與蛋白形成酰胺鍵，化學性質穩定。
★Epoxy Focurose 4FF應用廣泛，偶聯條件溫和，偶聯效率高。