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Anti-Flag 磁珠

MCE 國際站：Anti-Flag Magnetic Beads

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K0207

中文名稱：Anti-Flag 磁珠

存儲條件：4°C，2年請勿離心、干燥或冷凍磁珠。

產品活性：Anti-Flag 磁珠可用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統中 Flag 標記蛋白的免疫沉淀（IP）實驗，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白質純化實驗。

生物活性：Anti-Flag 磁珠由高質量的鼠源 IgG1 單克隆抗體與氨基磁珠共價偶聯制備，可識別 Flag 標簽 (DYKDDDDK) 重組蛋白。 1. 免疫沉淀時只需少量磁珠。 2. 方便省時。 3. 非特異性結合率低。 4. 樣品損失少。 5. 蛋白質結合能力高達 0.6 mg/mL。 6. 穩定。

操作流程：1. 抗原樣品制備根據不同的樣品選擇合適的處理方法2. 磁珠預處理混懸 Anti-Flag 磁珠，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架上磁性分離，棄上清。重復以上洗滌步驟 2 次。3. 樣品的結合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細胞裂解液，充分混懸，置于翻轉混合儀孵育，室溫孵育 2 小時或者 4℃ 條件下孵育過夜。置于磁力架上磁性分離，棄上清。注： 結合過程中，磁珠可能會出現聚團或呈片狀，屬于正常現象，不會影響實驗結果。4. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸磁珠，磁性分離，棄上清。重復以上洗滌步驟 3 次，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于0.05 為止。注： 如上清液的 OD280 大于 0.05，適當增加洗滌次數即可。5. 洗脫本說明書提供三種 Flag 標簽蛋白洗脫方案，操作者可以根據后期檢測的需要選擇不同的洗脫方案。1) 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻，95°C 加熱 5 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，進行 SDS-PAGE 檢測。2) 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脫緩沖液 A (0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1) 混合均勻，室溫孵育 10 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液 (1 M Tris-HCl, pH 8.0)，將洗脫產物 pH 調節至中性，樣品用于后期功能分析。3) 競爭性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B (1 mg/mL 3× Flag peptide, 50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.4)混合均勻，室溫孵育 1 小時或者 4°C 條件下孵育 1-2 小時。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白，樣品用于后期功能分析。

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