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Sph I

MCE 國際站：Sph I

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20°C 兩年

簡介：Sph I 是經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。Sph I 的同裂酶有：Pae I。

概述：Sph I 是經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。Sph I 的同裂酶有：Pae I。本產(chǎn)品含通用的 Buffer 和 Color Buffer，其中 Color Buffer 含紅色和黃色示蹤染料，酶切產(chǎn)物可直接用于凝膠電泳。Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

描述：

•    Sph I 在 10× 緩沖液 和 10× 顯色緩沖液 中 100% 活躍。10× 顯色緩沖液包含密度試劑以及紅色和黃色示蹤染料，可直接將反應(yīng)混合物加載到凝膠上。顯色緩沖液的紅色染料與 1% 瓊脂糖凝膠中的 2500 bp DNA 片段一起遷移，而顯色緩沖液的黃色染料比 1% 瓊脂糖凝膠中的 10 bp DNA 片段遷移得更快。

•   切割位點(diǎn)：

3'…G  C  A  T  G^▼C…5'


5'…C_▲G  T  A  C  G…3'

操作說明：1. DNA 快速酶切流程1.1 在冰上配制反應(yīng)體系注：若底物 DNA 為 PCR 產(chǎn)物，建議使用經(jīng)純化的 PCR 產(chǎn)物。若使用未經(jīng)純化的 PCR 產(chǎn)物，可將 10× Buffer 或 10× Color Buffer 減少至 2 μL。1.2 輕輕吸打或輕彈管壁混勻反應(yīng)液。切勿渦旋。瞬時(shí)離心收集掛壁液滴。1.3 對(duì)于質(zhì)粒 DNA，37°C 孵育 15 min；對(duì)于 PCR 產(chǎn)物，37°C 孵育 15~30 min；對(duì)于基因組 DNA，37°C 孵育 30~60 min。1.4 （可選步驟）80°C 孵育 20 min 可使酶失活，停止反應(yīng)。1.5 若使用 10× Color Buffer，酶切產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。2. 適用于質(zhì)粒 DNA 的擴(kuò)大反應(yīng)體系注：若總反應(yīng)體系大于 20 μL，可適當(dāng)增加孵育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

注意事項(xiàng)：1. 若進(jìn)行雙酶切或多酶切，每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μL，且所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的 1/10。可根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系。2. 若同時(shí)使用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，則應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，并在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切。3. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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