小鼠結腸類器官培養試劑盒
MCE 國際站：Mouse Colonic Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.Supplement E : Room temperature, 60 months. Shipping with blue ice.
簡介：MCE 小鼠結腸類器官培養試劑盒包含小腸類器官基礎培養基 A，培養添加物 B (50x)，培養添加物 C (250x)，培養添加物 D (250x) 以及 EDTA。該產品可有效構建小鼠小腸類器官。
概述：MCE 小鼠結腸類器官培養試劑盒包含結腸類器官基礎培養基 A、培養添加物 B (50x)，培養添加物 C (250x)、培養添加物 D (250x) 以及 EDTA。該產品可用于有效構建小鼠結腸類器官。腸道隱窩底部存在的干細胞及其祖細胞具有自我更新和分化成各種腸道細胞類型的能力，以確保類器官的持續生長和維持，模擬真實結腸組織的特征。小鼠結腸類器官對于研究結腸發育、疾病機制和藥物篩選具有重要意義。
描述：
• MCE小鼠結腸類器官試劑盒含有結腸類器官基礎培養基A、結腸類器官補充劑B（50x）、結腸類器官補充劑C（250x）、結腸類器官補充劑D（250x）和EDTA。本產品可用于高效構建小鼠結腸類器官。
• 源自原發組織的結腸類器官具有自我更新能力，可模仿真實結腸組織的特征。小鼠結腸類器官可用于研究結腸發育、疾病機制和藥物篩選。
操作說明：1. 配制小鼠結腸類器官培養基冰上解凍小鼠結腸類器官培養添加物 B、小鼠結腸類器官培養添加物 C、小鼠結腸類器官培養添加物 D，按下列組分配制小鼠結腸類器官培養基，充分混勻后置于冰上備用。a. 配制小鼠結腸類器官擴增培養基b. 配制小鼠結腸類器官分化培養基2. 提取原代組織細胞a. 使用預冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代小鼠結腸組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，使用小鼠結腸類器官基礎培養基 A 或者 PBS 沖洗已去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代小鼠結腸組織，然后在細胞培養皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為 2 mm 的碎片，隨后轉移至含 15 mL 錐形管中。c. 加入 10 mL 預冷的 2 mM EDTA-PBS，4°C 孵育 30 分鐘。d. 孵育完成后，讓組織片沉淀到管底，吸去上清。加入10 mL 預冷 PBS 清洗一遍。此步驟也可將組織碎片轉移到培養皿中用 PBS 清洗 2 次，去除 EDTA。e. 在含有預冷 PBS 的培養皿或者 50 mL 離心管中，用 5 mL 的移液管用力吹打破碎組織，釋放隱窩，取 10 uL 通過顯微鏡觀察確認已分離出大量腸隱窩。f. 使用 70 μm 的濾網過濾，收集濾液。4°C 300 g 離心 3 分鐘，棄上清。g. 加入 1 mL PBS 重懸，取 20 μL 懸液進行鏡檢和隱窩計數，計數后收集重懸液 4°C 300 g 離心 3 分鐘，棄上清后置于冰上待用。3. 構建類器官a. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質膠中，推薦重懸密度為每 10 μL 包含 20-120 個隱窩。重懸后盡快進行鋪板。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25分鐘進行固化。c. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 小鼠結腸類器官擴增培養基，避免破壞已有的凝膠結構。然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。d. 密切關注類器官生長狀態，每隔 3 天更換一次培養基。一般情況下，5-7 天可觀察到小鼠結腸類器官生成。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養基，向孔中加入 500 μL 預冷小鼠結腸類器官基礎培養基 A，用潤洗過的移液器吹打將細胞培養孔內容物剝離出培養板并轉移至 1.5 mL EP 管內。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質膠分離，250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀。c. 加入適量的類器官消化液置于 37°C 培養箱中充分消化 2 分鐘后加入 1 mL 小鼠結腸類器官基礎培養基 A 終止消化。d. 4°C 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀，加入1 mL 小鼠結腸類器官基礎培養基 A 重懸。e. 4°C 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀，置于冰上待用。f. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質膠中，盡快進行鋪板。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。g. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。h. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預熱的小鼠結腸類器官擴增培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。i. 密切關注結腸類器官的生長狀態，當類器官的直徑超過 100 μm 后，吸去小鼠結腸類器官擴增培養基，并加入 500 μL 小鼠結腸類器官分化培養基，每 2 天更換一次分化培養基。j. 密切關注結腸類器官的生長狀態，通常分化需要至少 4 天，分化的類器官可進行后續實驗
注意事項：1. 配制后的培養基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續實驗污染。3. 基質膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應將其迅速注入細胞培養孔內，盡量避免產生氣泡。4. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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