人結腸類器官培養試劑盒
MCE 國際站：Human Colonic Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡介：MCE 人結腸類器官培養試劑盒包含結腸類器官基礎培養基 A 以及培養添加物 B(50x)，培養添加物 C (250x) 和培養添加 D (250x)。該產品可有效構建人結腸類器官。
概述：MCE 人結直腸類器官培養試劑盒包含人結直腸類器官基礎培養基 A、培養添加物 B (50x)、培養添加物 C (250x) 和培養添加 D (250x)。該產品可用于有效構建人結直腸類器官。腸道隱窩底部存在的干細胞及其祖細胞具有自我更新和分化成各種腸道細胞類型的能力，以確保類器官的持續生長和維持，模擬真實結直腸組織的特征。人結直腸類器官對于研究結直腸發育、疾病機制和藥物篩選具有重要意義
描述：
• MCE 人體結腸類器官試劑盒包含人體結腸類器官基礎培養基A、人體結腸類器官添加物B（50x）、人體結腸類器官添加物C（250x）和人體結腸類器官添加物D（250x），本產品可用于高效構建人體結腸類器官。
• 干細胞和祖細胞位于腸粘膜隱窩底部，具有自我更新和分化成各種成熟細胞的能力。來自原代組織的結腸類器官具有自我更新能力，模仿真實結腸組織的特征。結腸類器官可用于研究結腸發育、疾病機制和藥物篩選。
操作說明：1. 配制人結直腸類器官培養基冰上解凍人結直腸類器官培養添加物 B、人結直腸類器官培養添加物 C、人結直腸類器官培養添加物 D，按下列組分配制人結直腸類器官培養基，充分混勻后置于冰上備用。a. 按下列組分配制人結直腸類器官擴增培養基，專門用于原代培養和復蘇。充分混勻后置于冰上備用2. 提取原代組織細胞a. 使用預冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代人結直腸組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的結直腸類器官基礎培養基 A 或者 PBS 沖洗去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人結直腸組織，然后在細胞培養皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為 2 mm 的碎片，隨后轉移至含有 10 mL 預冷的 PBS 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量結直腸類器官基礎培養基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養基，在后續步驟中，使用 10% FBS 培養基潤洗 10 mL 移液管的內表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗樣品樣本至少 10 次。靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清，加入預冷 10 mL FBS。重復該步驟 3-5 次直到上清沒有碎屑。e. 往管中加入 10 mL 預冷的組織消化液，放在搖床上在 4°C 下輕輕搖晃 40 分鐘。f. 一旦隱窩結構出現，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化，然后使用 100 μm 的細胞過濾網進行過濾，收集過濾液。g. 在 4°C 下以 250 g 離心過濾液 3 分鐘收集細胞沉淀。隨后將細胞重懸于人結直腸類器官培養基 A 中，重復此前離心步驟 1-2 次以收集細胞沉淀。3. 構建類器官a. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質膠中，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。b. 使用預先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質膠與細胞混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預熱的人結直腸類器官擴增培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。d. 密切關注類器官生長狀態，每隔 3-4 天更換一次培養基。一般情況下，5-8 天可觀察到人結直腸類器官生成。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養基，向孔中加入 500 μL 預冷人結直腸類器官基礎培養基 A，使用細胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細胞培養孔內容物剝離出培養板并轉移至 1.5 mL EP 管內。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質膠分離，200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 人結直腸類器官基礎培養基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 的類器官消化液置于 37°C 培養箱中充分消化 2 分鐘后加入 5 倍消化液體積的人結直腸類器官基礎培養基 A 終止消化。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用人結直腸類器官基礎培養基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質膠中，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL。重懸后盡快進行鋪板。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。e. 使用預先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質膠與細胞混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。f. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預熱的人結直腸類器官穩態培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2的培養箱中。g. 密切關注類器官的生長狀態，記錄多個視野中的結直腸類器官的形態和分布。
注意事項：1. 配制后的培養基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續實驗污染。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態，出現小細胞團（10-50 個細胞）時應終止消化，避免時間過長影響類器官后續生長活力。4. 基質膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應將其迅速注入細胞培養孔內，盡量避免產生氣泡。5. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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