人膽管癌類器官培養試劑盒
MCE 國際站：Human Cholangiocarcinoma Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
簡介：MCE 人膽管癌類器官培養試劑盒包含膽管癌類器官基礎培養基 A 以及培養添加物 B (50x) 和培養添加物 C (250x)。該產品可有效構建人膽管癌類器官。
概述：MCE 人膽管癌類器官培養試劑盒包含膽管癌類器官基礎培養基 A 以及膽管癌類器官培養添加物 B (50x) 和膽管癌類器官培養添加物 C (250x)，可用于有效構建人膽管癌類器官。膽管癌類器官能夠高度模擬膽管癌的腫瘤微環境，便于觀察膽管癌細胞的生長和增殖情況，可用于追蹤腫瘤細胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的效力與毒性。
描述：
• MCE人膽管癌類器官試劑盒含有膽管癌類器官基礎培養基A、膽管癌類器官添加物B（50x）、膽管癌類器官添加物C（250x），本產品可用于高效構建人膽管癌類器官。
• 膽管癌類器官可高度模擬膽管癌腫瘤微環境，便于觀察膽管癌細胞的生長增殖情況，可用于追蹤腫瘤細胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的療效和毒性。
操作說明：1. 配制膽管癌類器官培養基按下列組分配制膽管癌類器官培養基，充分混勻后置于冰上備用。2. 提取腫瘤細胞a. 使用預冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的腫瘤組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的膽管癌類器官基礎培養基 A 或者 PBS 沖洗以去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分。然后在細胞培養皿中用無菌剪刀將沖洗后的腫瘤組織分成盡可能小的碎片（直徑約為 1-2 mm），隨后使用 1 mL 移液槍槍頭將其轉移至 15 mL 錐形管中。c. 向 15 mL 錐形管中加入適量腫瘤組織消化液和組織碎片，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。將錐形管置于水平搖床上以 37°C 孵育大約 0.5 小時，直至大部分碎片可以被 1 mL 移液槍槍頭吸起。d. 往腫瘤組織消化混合液中加入適量 FBS，FBS 終濃度為 2%，然后使用 100 μm 的細胞過濾器在冰上進行過濾。e. 使用低溫離心機在 4°C 溫度下以 250 g 離心 3 分鐘后收集細胞沉淀。如細胞沉淀呈紅色，可吸出上清液后加入 1-2 mL 的紅細胞裂解液重懸，盡量避免移液槍槍頭接觸到試管底。室溫下裂解 1 分鐘后重新置于 4°C 低溫離心機內以 250 g 離心 3 分鐘收集細胞沉淀。f. 往收集的細胞沉淀中加入適量的膽管癌類器官基礎培養基 A 進行重懸，然后置于 4°C 低溫離心機內以 250 g 離心 3 分鐘收集細胞沉淀，重復該步驟 1-2 次。3. 構建類器官a. 在冰上將收集的腫瘤細胞重懸于 MCE 基質膠中，推薦細胞密度為 4x104/100 μL 基質膠，建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。b. 使用預先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質膠與細胞混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 膽管癌類器官培養基，避免破壞已有的凝膠結構。然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中培養。d. 密切關注類器官生長狀態，每隔 3-4 天更換 500 μL 在 37°C 預熱后的膽管癌類器官培養基體積。7-10 天即可觀察到膽管癌類器官的生成。4. 類器官傳代a. 建議在膽管癌類器官直徑大于 200 μm 或顏色發黑時吸去上層培養基，加入 500 μL 膽管癌類器官基礎培養基 A。使用細胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細胞培養孔內容物剝離出培養板并轉移至 1.5 mL EP 管內。b. 使用移液槍槍頭輕柔地吹打至膽管癌類器官與基質膠分離，然后置于室溫離心機內以 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 膽管癌類器官基礎培養基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 的類器官傳代消化液置于 37°C 培養箱中充分消化至類器官分散為包含 10—50 個細胞的細胞團，時間控制在 5 分鐘以內。隨后加入 5 倍消化液體積的膽管癌類器官基礎培養基 A 終止消化。c. 在室溫下以 250-300 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用膽管癌類器官基礎培養基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 將收集的類器官碎片在冰上重懸于基質膠中，推薦細胞密度為 4x104/100 μL 基質膠，建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。e. 然后將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘。f. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 膽管癌類器官培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。g. 密切關注類器官生長狀態，每隔 3-4 天更換 500 μL 預熱的膽管癌類器官培養基。
注意事項：1. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續實驗污染。2. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態，出現小細胞團（10-50 個細胞）時應終止消化，避免時間過長影響類器官后續生長活力。3. 基質膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應將其迅速注入細胞培養孔內，盡量避免產生氣泡。4. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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