siRNA/miRNA轉染試劑
MCE 國際站：siRNA/miRNA Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20°C，1 年避免反復凍融
簡介：MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 是一種陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用于 siRNA 和 miRNA 的轉染。
概述：RNA 干擾 (RNA interference, RNAi)是指小分子雙鏈 RNA 能夠特異性地降解同源的 mRNA，從而抑制或關閉相應基因表達的現象。使用 RNAi 技術設計針對致病基因 mRNA 的小分子干擾 RNA (Small interfering RNA, siRNA)，可以特異性剔除或關閉特定基因的表達。MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 是一種陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用于 siRNA 和 miRNA 的轉染。外源 siRNA/miRNA 與轉染試劑形成穩定復合物，通過胞吞作用進入細胞，隨后在胞質釋放出 siRNA/miRNA，實現siRNA/miRNA 的細胞轉染。MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 具有以下優點：適用范圍廣：可作用于多種細胞系，適合 siRNA/miRNA 介導的基因抑制實驗。轉染效率高：高效轉染原代細胞，細胞存活率高。細胞毒性低：能較好平衡高轉染效率與細胞活力，作用溫和。操作簡便：實驗方案簡單快速，結果穩定可靠，轉染后無需去除復合物或更換新鮮培養基。
描述：
RNA干擾（RNAi）是指能夠特異性降解同源mRNA，抑制或關閉相應基因表達的小雙鏈RNA。利用RNAi技術設計針對致病基因mRNA的小干擾RNA（siRNA），可以特異性地敲除或關閉特定基因的表達。
MCE siRNA/miRNA轉染試劑是一種新型陽離子聚合物轉染試劑，用于siRNA和miRNA的轉染。外源性的siRNA/miRNA與轉染試劑形成穩定的復合物，通過胞吞作用進入細胞內，在胞漿中釋放出siRNA/miRNA，實現siRNA/miRNA的細胞轉染。
MCE siRNA/miRNA轉染試劑的特點
應用范圍廣：在多種常見細胞類型中均有較高的轉染效率，適用于siRNA/miRNA介導的基因抑制實驗。
轉染效率高：可高效轉染原代細胞，且細胞活力高。
細胞毒性低：作用溫和，生物相容性好。
操作簡單：轉染后無需去除轉染復合物或更換培養基。
操作說明：1.準備待轉染細胞(1)貼壁細胞：轉染前一天，將消化后的細胞按照 0.1-1 × 105 個細胞/孔鋪板，使其在轉染時密度為 30%-40%。(2)懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-核酸復合物之前，先進行細胞鋪板，每 500 μL 生長培養基中加入 0.5-2.5 × 105 個細胞注：為提高轉染效率，建議使用生長狀態良好且生長處于指數期、存活率大于 90% 的細胞進行轉染2.準備轉染試劑-核酸復合物(1)取 1 μL siRNA/miRNA (20 μM，DEPC 水溶解) 加入到 1.5 mL 離心管中，加入 2 μL siRNA/miRNA 轉染試劑與 siRNA/miRNA 混合，室溫靜置孵育 3 min。注：最佳轉染條件因細胞類型和培養條件不同而有所區別，可做預實驗摸索最佳轉染比例。建議選取 siRNA/miRNA 作用濃度在 10-100 nM 之間，轉染試劑的體積應根據 siRNA/miRNA 濃度和培養皿的大小進行調整注：細胞轉染時，可根據實際情況參考上表進行等倍放大。(2)加入 100 μL 減血清培養基（無血清無雙抗），輕柔混勻，室溫靜置孵育 30 min，即形成轉染試劑-核酸復合物。3.細胞轉染孵育結束，將轉染試劑-核酸復合物 (100 μL) 加入每孔細胞，輕柔混勻，放置于培養箱中繼續培養。4.分析轉染效率轉染細胞培養 24-48 h 后，可使用熒光檢測法、Western Blot、ELISA、RT - PCR、流式細胞術、報告基因等檢測轉染效果，或進行后續功能實驗
注意事項：1.為了獲得較高的轉染效率，建議選用經過 PAGE 純化和脫鹽處理的高純度 siRNA/miRNA。2.細胞狀態會極大影響轉染效率，建議使用生長狀態良好且生長處于指數期、存活率 > 90% 的細胞進行轉染。3.通常情況下，轉染復合物中 siRNA/miRNA (μL) 與 siRNA/miRNA Transfection Reagent (μL) 的比例為 1:2。為提高轉染效果，可在 1:1-1:3 范圍內調整以優化轉染效果。4.轉染過程中，抗生素的存在可能導致轉染效率降低及細胞毒性，不建議在轉染培養基中添加抗生素。5.血清會對轉染效果產生一定程度的干擾，為提高轉染效率，轉染過程中，建議使用無血清培養基。6.影響轉染效率的因素有很多，如細胞類型、細胞狀態及密度、核酸質量及濃度、轉染試劑與核酸比例等，建議先做預實驗摸索最佳轉染條件。7.為避免 RNA 酶污染，整個實驗過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液等。8.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。9.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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