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Annexin V-iFluor 488/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

MCE 國際站：Annexin V-iFluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4°C, 2 年避光保存

簡(jiǎn)介：MCE Annexin V-iFluor 488/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可方便、快捷的檢測(cè)細(xì)胞凋亡。經(jīng) Annexin V-iFluor 488 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無熒光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光 (Annexin V+/PI+)。

概述：MCE Annexin V-iFluor 488/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用 iFluor 488 標(biāo)記的重組人 Annexin V 檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS) 位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞凋亡早期，PS 會(huì)外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V (膜聯(lián)蛋白 V) 是一種 Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與 PS 特異性結(jié)合，因此Annexin V 常作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。Annexin V 經(jīng) iFluor 488 標(biāo)記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色熒光染料，可對(duì)凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。經(jīng) iFluor 488 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無熒光 (Annexin V-/PI-)，早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光 (Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光 (Annexin V+/PI+)

描述：

MCE Annexin V-iFluor 488/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一種快速便捷的方法來檢測(cè)細(xì)胞凋亡和壞死。在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面。在細(xì)胞凋亡開始時(shí)，PS 從膜的內(nèi)層轉(zhuǎn)移到外層。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì) PS 具有高親和力。用 iFluor 488 標(biāo)記的 Annexin V 可以通過與外層暴露的 PS 結(jié)合來識(shí)別凋亡細(xì)胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細(xì)胞膜不透性染料，對(duì)活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞無效，但對(duì)晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞則呈紅色熒光。用Annexin V-iFluor 488和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色后，活細(xì)胞無熒光或僅有少量熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色和綠色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作說明：1. 收集細(xì)胞：收集 1-5 × 105個(gè)細(xì)胞。懸浮細(xì)胞：2000 rpm 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀， 2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，洗滌兩次，保留細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞：小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆谩＜尤脒m量預(yù)冷的 PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液 (盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 與 PS 結(jié)合) 消化細(xì)胞。加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，2000 rpm 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，洗滌兩次，保留細(xì)胞沉淀。2. 加入 500 μL 1× Binding Buffer，輕輕重懸細(xì)胞。注：使用 ddH2O 將 10× Binding Buffer 稀釋為 1× Binding Buffer，如取 0.1 mL 10× Binding Buffer 加入 0.9 mL ddH2O，充分混勻后即為 1× Binding Buffer。3. 加入 5 μL Annexin V-iFluor 488，輕輕混勻。4. 加入 5 μL PI Solution，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 15-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強(qiáng)染色效果。6. 檢測(cè)與分析流式細(xì)胞儀檢測(cè)：用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。注：a. 流式檢測(cè)時(shí)，iFluor 488 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 514 nm，在 FL1 通道檢測(cè)；PI-DNA 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 535 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 617 nm，在 FL2 或 FL3 通道檢測(cè)。b. 建議設(shè)置三組對(duì)照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-iFluor 488 單染組。熒光顯微鏡檢測(cè)：2000 rpm 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL 1× Binding Buffer 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

注意事項(xiàng)：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測(cè)熒光強(qiáng)度，且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光進(jìn)行。2. 若使用胰酶處理貼壁細(xì)胞，應(yīng)盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-iFluor 488 降解從而導(dǎo)致染色失敗。3. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，若 Annexin V-iFluor 488 單獨(dú)染色組出現(xiàn)較多 PI 假陽性細(xì)胞，可用 PBS 將 Annexin V-iFluor 488 稀釋 3-10 倍后再進(jìn)行檢測(cè)。4. Annexin V-iFluor 488 和碘化丙啶（PI）均對(duì)人體有害，操作時(shí)務(wù)必小心。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Saccharin  | Verminoside  | DX600  | Diallyl Trisulfide  | RNAIII-inhibiting peptide(TFA)  | Citalopram  | FH1  | Brassicasterol  | Ethionamide  | Xanthosine

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