基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測技術服務詳情介紹

表達純化后的蛋白產物，特別是蛋白品的分析過程中，需要對蛋白的末端進行驗證，以保證表達純化產物的N端和C端序列準確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，有著廣泛的應用。百泰派克公司采用島津公司Edman測序系統，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產物、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務。采用我們的測序系統，可以測定N端30個氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統，可以測定N端的60-70個氨基酸。百泰派克公司也建立了以優良的LC-MS/MS技術進行N-端測序的平臺，可以測出封閉和修飾的蛋白質末端，與Edman降解法形成互補，保證N端測序服務的順利進行。 在蛋白質測序前，蛋白樣品首先經過SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉移到PVDF膜上；經過染色確定把蛋白條帶并切出；使用Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。Edman降解測序是通過循環反應從蛋白質的N端開始逐個鑒定氨基酸的種類，從而對蛋白質的N端序列進行測定。每一個Edman測序反應包括3步：dìyī步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結合的殘基轉化成為更為穩定的PTH殘基，經過在線的HPLC分析，根據洗脫時間確定氨基酸種類。

Edman測序反應過程

基于Edman降解的蛋白質N端測序服務流程

Edman測序實驗流程圖

應用領域

• 蛋白表達產物的驗證：重組蛋白插入位點和表達順序是否正確； • 細胞株建立和發酵過程中蛋白產物的驗證：驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物N端jiǎliúānsuān和信號肽是否正確處理； • 蛋白降解/酶切分析：對降解/酶切形成的新蛋白片段N端進行分析，確定斷裂/酶切位點； • De-novo測序：對于蛋白數據庫中不存在的全新蛋白序列進行分析。

關于樣品

PVDF膜類樣品的準備過程 1.樣品電泳和電轉 a. 對蛋白樣品進行1D或者2D跑膠 b. 將蛋白膠上的樣品轉移至PVDF膜上；注意：千萬不要使用硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membranes） c. 在此過程中請佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對測序結果的影響 2.PVDF膜的染色 a. 染色過程中可以使用考馬斯亮藍或者立春紅對PVDF膜進行染色；注意：千萬不要使用銀染的方法進行染色 b. 染色完成之后，可以使用雙蒸水對PVDF膜進行清洗 c. 如果轉膜的緩沖液中含有gānānsuān，需要對PVDF膜進行多次沖洗，以避免gānānsuān對后續分析的影響 d. 更詳細的樣品準備步驟，見Edman測序樣品準備Protocol 3.靶蛋白條帶獲取 a. PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的jiěpōudāo將靶蛋白條帶切下 b. 在蛋白量允許的情況下，可以準備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量 4.樣品運輸 對切下的蛋白條帶進行密閉包裝，使用冰袋運輸即可 溶液樣品的準備過程 1.蛋白的純度和用量 a. 樣品需要量在1-10 ug b. 樣品純度要＞90% c. Buffer中不要使用表面活性劑，并盡可能降低溶液的鹽濃度 d. Tris, glycine, guanidine, glycerol, sucrose, ethanolamine, SDS, Triton, X-100, Tween和其他的去垢劑，ammonium sulfate和其他的銨鹽均會對后續的氨基酸鑒定產生影響，在樣品準備過程中要避免使用 e. 樣品準備過程全程佩戴口罩和頭套，避免角蛋白的影響 2.蛋白樣品的運輸 a. 液體樣品推薦干冰運輸 b. 液體樣品也可以在冷凍抽干或者真空抽干后，使用冰袋運輸

研究案例

如下圖所示，通過Edman測序，可提供鑒定的氨基酸的詳細信息。

Edman測序研究案例

中/英文項目報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括： 1. 實驗步驟（中英文） 2. 相關的質譜參數（中英文） 3. 蛋白質N端測序的詳細信息 4. 質譜圖片 5. 原始數據

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測技術服務詳情介紹