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標準的pull-down分析需要帶有重組親和標簽的純化蛋白,該標簽具有“誘餌”的功能,并固定在標簽特異性親和配體上。然后將另一種蛋白質或“獵物”蛋白質與“誘餌”蛋白質一起孵育。當這兩種蛋白質發生物理相互作用時,“獵物”蛋白質將被“誘餌”蛋白質捕獲。之后,取決于親和配體,可以使用洗脫緩沖液洗脫相互作用的“獵物”蛋白。zuì后,“獵物”和“誘餌”蛋白都可以通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離,然后對凝膠染色通過蛋白質印跡法進行檢測。 GST pull-down融合蛋白沉降技術,利用基因重組將帶有GST標簽的載體插入到目標蛋白A上,gǔguānggāntài包裹的磁珠與目標融合蛋白結合,加入細胞裂解液后,具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附,加入過量的gǔguānggāntài進行洗脫,洗脫后的樣品通過質譜分析法對樣品進行分析鑒定。GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白相互作用分析主要是研究體外強烈或者穩定的蛋白質間相互作用;可以鑒定兩種已知的感興趣蛋白質可能存在的直接相互作用;尋找可能與目標蛋白存在相互作用關系的未知蛋白。 除了確認蛋白質之間的相互作用外,GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白互作分析法還可用于表征蛋白相互作用的條件。例如,使用蛋白質結構域截短法進行pull-down法可以對蛋白質相互作用至關重要的功能區域進行確定。此外,GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白相互作用分析法還可用于探索目的蛋白質相互作用的伴侶,將“誘餌”蛋白與混合蛋白溶液或細胞/組織提取物一起孵育。洗滌步驟后,可以通過高通量方法洗脫并對結合的蛋白質進行質譜鑒定。 *百泰派克提供基于質譜的pull-down樣品蛋白質譜鑒定,詳情參見:
基于質譜的互作蛋白質譜分析方法
Pull-down互作蛋白質分析流程
作為lǐngxiān的組學技術服務公司,百泰派克生物科技在基于質譜的蛋白互作分析方面擁有多年經驗。百泰派克提供蛋白表達和純化的高效策略,以及用于pull-down蛋白互作分析的zuì優優化方案。我們以嚴格的質量控制和較短的檢測周期為特色,百泰派克生物科技為節省您的寶貴時間和預算,向客戶提供可定制的一站式服務,涵蓋您項目中從基因合成到數據報告的每個步驟: • 基因合成,表達質粒構建-誘餌蛋白的表達,純化和固定化-獵物蛋白的表達和純化-孵育,洗滌和洗脫 • 通過SDS-PAGE, Western對蛋白相互作用進行鑒定 • LC-MS質譜鑒定相互作用蛋白-數據分析-出具中英文報告-免費咨詢
互作蛋白分析: 蛋白質譜鑒定/質譜分析: 蛋白分離純化:
蛋白質CO-IP免疫共沉淀法技術服務
蛋白膠點、膠條、IP、CO-IP、pull-down樣品蛋白質質譜鑒定服務
基于SDS-PAGE的蛋白分離服務
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質,提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種蛋白質標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!
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