檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被血小板衍生生長因子α（PDGF-α）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板衍生生長因子α（PDGF-α）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實(shí)驗(yàn)需自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

大鼠血小板衍化生長因子αELISA檢測試劑盒性能：

1.     準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.      靈敏度：請(qǐng)參考說明書。

3.      特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.      重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)小于15% 。

技術(shù)小提示：

1.      當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí)，盡量避免起沫。

2.      為了避免交叉感染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。

3.      每次孵育時(shí)，請(qǐng)正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.      混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色，請(qǐng)避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍(lán)色。

5.      終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻；請(qǐng)充分混合。

大鼠血小板衍化生長因子αELISA檢測試劑盒常見問題解答：

1.     問：必須同時(shí)使用所有的樣本嗎？樣本可能需要分批次收集。

上海軒澤康生物解答：不用。我司每一個(gè)試劑盒都使用可拆卸條形微孔板。可以在不同的時(shí)間取檢測不同數(shù)量的樣本。

2.     問：是否可以使用不同試劑盒的組分？

上海軒澤康生物解答：每一個(gè)試劑盒包含具有特定批號(hào)的組件，以確保所有組件單獨(dú)以及試劑盒中所有其他組件都能達(dá)到最佳性能。我司對(duì)這些特定批次進(jìn)行質(zhì)量控制測試。絕不建議用戶使用自己的組件或其他供應(yīng)商試劑盒。

3.     如何洗板？

上海軒澤康生物解答：如果您使用的是自動(dòng)洗板機(jī)，我們建議定期檢查校正，并在清洗前用洗板機(jī)緩沖液沖洗系統(tǒng)。手動(dòng)洗板機(jī)也是如此。或者使用中繼器或洗滌瓶。用戶應(yīng)小心確保所有內(nèi)容物都被吸入，并在無棉紙上輕敲干燥。