大鼠FⅤ酶聯免疫（ELISA）試劑盒（科研實驗專用）操作步驟：步驟一：使用前將所有試劑平衡至室溫并充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫以免加樣時加入大量的氣泡產生加樣上的誤差。步驟二：根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。步驟三：【加樣】加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物，素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37攝氏度溫育45分鐘。步驟四：【洗滌】甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液振蕩30秒，甩去洗滌液用吸水紙拍干。重復此操作4次，也可以用洗板機洗滌。步驟五：每孔加入100ul的HRP輕輕振蕩混勻37攝氏度溫育30分鐘。步驟六：重復洗滌步驟。步驟七：每孔加入底物A、B溶液各50ul，輕輕振蕩混勻，37攝氏度溫育5分鐘，避免光照。步驟八：取出酶標板迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。步驟九：在450nm波長處測定各孔的OD值。

備注：1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。2.標準品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 pg/ml3. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

大鼠FⅤ酶聯免疫（ELISA）試劑盒檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被（FⅤ）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的（FⅤ）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

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