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BCA蛋白濃度測定試劑盒
貨號：B5001
存儲條件：冰袋運輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋白標準品（BSA）置于4℃保存，有效期2年。
產品規格：
BCA試劑A 100ml
BCA試劑B 3ml
蛋白標準品 2x1ml (5mg/ml)
PBS溶液 10ml
產品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，產生一種紫藍色復合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過，由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低最di檢測水平。
產品特點
1）靈敏度高，最小檢測蛋白量可達0.2μg，檢測濃度下限達10μg/mL(在20~1000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系）。
2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。
3）線性范圍廣，20-1000μg/mL濃度范圍內有較好的線性范圍。
4) 不受大部分樣品中的化學物質的影響, BCA法測定蛋白濃度的最da優點是蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM; β-巰基乙醇低于0.01%。
操作說明
BCA 工作液配制：
將試劑A和試劑B按照體積比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL試劑A與1mL試劑B混合，配成51mL BCA工作液。兩者混合時會有沉淀形成，徹di混勻后沉淀消失。
微孔板測定程序：（工作范圍 20-2000 μg/ml）
1. 蛋白標準品配制：室溫wan全溶解蛋白標準品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白標準溶液用 PBS 溶液稀釋至 100µl使其終濃度為 1.0 mg/ml。
2. 按照下表配制 BSA 標準測定溶液：
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
1mg/ml BSA 標準溶液 μL | 5mg/ml BSA 標準溶液μL | ||||||||
BSA標準溶液 µl | 0 | 0.5 | 2.5 | 5.0 | 10 | 15 | 20 | 6 | 8 |
PBS溶液 μl | 20 | 19.5 | 17.5 | 15 | 10 | 5 | 0 | 14 | 12 |
BSA終濃度 μg/ml | 0 | 25 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
總體積 µl | 20ul | ||||||||
3. 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，并用 PBS 補足到 20 µl
4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混勻, 37 ℃放置30分鐘； 注：也可以室溫放置2小時,或 60 ℃放置30分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低, 適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。
5. 測定 562 nm處的吸光值， 并記錄讀數； 以不含BSA的樣品的光吸收值作為空白對 照。
6. 以A562為縱坐標, BSA含量為橫坐標, 繪制標準曲線, 計算樣品中的蛋白濃度. 如果蛋白濃度不在標準曲線范圍內, 請稀釋樣品后重新測定。
試管測定程序：（工作范圍 20-1000 μg/ml）
1. 蛋白標準品配制：室溫wan全溶解蛋白標準品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入600μL PBS溶液稀釋至750µl，使其終濃度為1.0 mg/ml。
2、按照下表配制 BSA 標準測定溶液：
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
1mg/ml BSA 標準溶液 μL | 5mg/ml BSA 標準溶液μL | ||||||||
BSA標準溶液 µl | 0 | 2.5 | 12.5 | 25 | 50 | 75 | 100 | 30 | 40 |
PBS溶液 μl | 100 | 97.5 | 87.5 | 75 | 50 | 25 | 0 | 70 | 60 |
BSA終濃度 μg/ml | 0 | 25 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
總體積 µl | 100ul | ||||||||
3. 將適當體積的待測樣品加入到試管中，并用 PBS 補足到100 µl；
4. 向試管中加入 2ml BCA 工作液，混勻，37 ℃放置30分鐘；
5 、6 步驟同上。
6. 注意事項
1）BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，顯色反應的速度和溫度有關，需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。
2）長期保存，若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染，則應丟棄。
3）實驗操作規范，提高上樣量的精確度。
4）每次測定都需做相應的標準曲線，因為顯色反應與溫度和時間的變化有關，精準蛋白定量宜每次都做標準曲線。
5）本公司所有產品僅限用于研發，必須專業人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規程！
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