酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，簡稱 ELISA，是用于檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法。它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。那么你知道ELISA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵點(diǎn)是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、樣本的儲(chǔ)存
合適的保存環(huán)境可以確保生物樣本在后續(xù)實(shí)驗(yàn)和研究中的可靠性和穩(wěn)定性，樣本長期保存建議在-80℃保存，1-2個(gè)月內(nèi)在-20℃保存，開展檢測時(shí)需分裝后保存4℃，并建議當(dāng)天短暫保存，單次使用后丟棄剩余部分。
為避免樣本的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和活性受損，盡量避免多次凍融，凍融次數(shù)對(duì)檢測結(jié)果的的影響是不容小覷的。經(jīng)測試對(duì)比發(fā)現(xiàn)：有些因子凍融2到3次甚至已經(jīng)降到非常低的含量水平，如大家經(jīng)常關(guān)注到的炎癥因子IL-1β、IL-15、IL-17、CXCL8等。
二、樣本內(nèi)外源性物質(zhì)
免疫方法檢測中，內(nèi)源性等因素干擾(自身抗體、異嗜性抗體、人抗動(dòng)物抗體及其他一些結(jié)合蛋白等)、脂血、交叉反應(yīng)、一些分析前變異(標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等)、基質(zhì)效應(yīng)甚至檢測設(shè)備的不同，均可對(duì)檢測結(jié)果造成干擾，引起許多檢測結(jié)果的假性升高或降低，包括激素、各類標(biāo)志物、藥物和病原微生物的血清學(xué)檢測等。
科研人員應(yīng)充分認(rèn)識(shí)免疫檢測中的各類干擾因素，在出現(xiàn)結(jié)果不符(包括檢測結(jié)果與臨床癥狀不符、檢測預(yù)期與文獻(xiàn)不符)時(shí)進(jìn)行原因分析，如檢測的樣本類型是否與所選試劑盒匹配。
三、樣本造模
生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中影響造模成功的因素很多，需要綜合考慮各種因素，以確保模型的可靠性和準(zhǔn)確性：
設(shè)置對(duì)照：在實(shí)驗(yàn)造模中，設(shè)置對(duì)照可以幫助確定造模是否成功。例如，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)處理后表現(xiàn)出不同的生理或生化反應(yīng)，則可以認(rèn)為造模是成功的。此外，通過對(duì)照還可以評(píng)估實(shí)驗(yàn)的可靠性，例如評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
多學(xué)科驗(yàn)證：在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，確定造模和對(duì)照是否成功需要考慮多個(gè)方面。如：觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病理癥狀、檢測生理指標(biāo)、檢測生化指標(biāo)、組織病理學(xué)檢查、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析等；
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：不同種類的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)模型的反應(yīng)可能不同。例如，某些藥物在小鼠和大鼠中的反應(yīng)可能會(huì)有所不同。因此，選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類對(duì)于造模成功至關(guān)重要。
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