在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
一、直接法原理
直接法是利用包被抗原，檢測(cè)抗體或者進(jìn)行重組蛋白的活性驗(yàn)證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過(guò)疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過(guò)引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合，以及通過(guò)表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當(dāng)然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過(guò)親和素與生物素的共價(jià)結(jié)合及親和素有四個(gè)殘基理論可結(jié)合個(gè)生物素的特性，使結(jié)合的蛋白更多，靈敏度進(jìn)一步提高，目前只是該方法的成本會(huì)升高。
直接法相對(duì)來(lái)說(shuō)靈敏度和特異性較其他方法低，目前使用較少，通常用于重組蛋白或重組抗體的結(jié)合活性驗(yàn)證。而使用親和素包被的板材主要原因在于大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，當(dāng)然好的板材也是成功的一半，聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能。各方面表現(xiàn)較為均衡，是ELISA 反應(yīng)中常用的固相載體。小分子蛋白由于吸附性較差，固使用這樣間接包被的形式才能起到理想的固定形式。
二、間接法原理
間接法相對(duì)直接法，靈敏度進(jìn)一步提升，利用一抗與抗原的特異結(jié)合，再加入通用二抗（即檢測(cè)抗體），如一抗使用的抗某蛋白的鼠抗，二抗可使用鼠/兔等抗該類(lèi)型抗體（IgG）的抗體，利用抗體的特異性識(shí)別，加之顯色用的二抗非直接與抗原結(jié)合，所以稱(chēng)之為間接檢測(cè)，該方法一般用于抗體的檢測(cè)，如重組抗體，或疫苗效價(jià)的檢測(cè)，咱們打疫苗的目的就是產(chǎn)生中和抗體嘛，該方法在IVD企業(yè)使用較多。
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