皖儀科技液相色譜對(duì)氯霉素的檢測(cè)方法
前言
氯霉素是一種廣譜抗生素,最初由委內(nèi)瑞拉鏈霉菌產(chǎn)生。它在1947年被首次分離成功,并在次年開始通過化學(xué)方法合成。氯霉素對(duì)多種需氧革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌、厭氧的擬桿菌、立克次氏體、衣原體及菌質(zhì)體都有抑制作用,尤其對(duì)沙門氏菌屬、流感桿菌和擬桿菌屬等有良好的抗菌能力。由于它的特性,在感染性疾病的治療中發(fā)揮著重要的作用。然而,氯霉素的使用也伴隨著一些副作用。氯霉素在人體內(nèi)蓄積的藥物濃度達(dá)到一定量時(shí)會(huì)產(chǎn)生多種急慢性中毒,并導(dǎo)致再生障礙性貧血癥和溶血性貧血等疾病,導(dǎo)致身體不能制造紅血球、白血球和血小板,同時(shí)還會(huì)引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴(yán)重失眠。還可引發(fā)中毒性精神病,主要表現(xiàn)為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。因氯霉素的毒副作用較大,聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織、歐盟、美國(guó)均明確規(guī)定在食用動(dòng)物中禁止使用氯霉素。2019年,在我國(guó),氯霉素也被列入食品動(dòng)物中禁止使用的藥品。因此,對(duì)氯霉素的檢測(cè)很有必要。
本篇介紹的分析方法,參考的是標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測(cè)定,采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測(cè)器測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試峰型良好,目標(biāo)峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好,R值在0.999以上,保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.116%,峰面積重復(fù)性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測(cè)試結(jié)果良好,濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,三倍信噪比作為檢出限計(jì)算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)方法中對(duì)儀器的要求。
1 方法原理
高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。
2 儀器配置及實(shí)驗(yàn)方法
2.1 儀器配置
表1 皖儀液相配置清單表
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品制備
表2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單
2.2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取10mg左右(精確到0.1mg)氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中,加甲醇超聲溶解,配成1000mg/L左右的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,-18℃冰箱保存。
2.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)使用液: 分別吸取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量,用甲醇稀釋為100mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液。需現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線:將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液用0.5mol/L高氯酸溶液稀釋濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L 系列濃度工作曲線。
2.2.2 色譜條件
表3 色譜條件
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 系統(tǒng)適用性
圖1 濃度為5mg/L氯霉素譜圖
說明:由圖可知,氯霉素峰型良好,目標(biāo)峰周圍無雜峰,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
3.2 線性關(guān)系
圖2 氯霉素標(biāo)曲
說明:本次測(cè)試的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L。由上圖可知,氯霉素線性方程為y=131.23850x+3.16337。R值為0.99978,線性良好,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
3.3 重復(fù)性
圖3 濃度為0.5mg/L的氯霉素6針重復(fù)性譜圖
表4 氯霉素6針重復(fù)性數(shù)據(jù)
說明:根據(jù)上表數(shù)據(jù)可知,氯霉素保留時(shí)間RSD為0.116%,峰面積RSD為0.378%。重復(fù)性均小于0.4%,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
3.4 檢出限
圖4 濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品譜圖
說明:根據(jù)上圖數(shù)據(jù)所示,濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,三倍信噪比為檢出限計(jì)算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。滿足實(shí)驗(yàn)要求。
3.5 注意事項(xiàng)
1. 高氯酸具有強(qiáng)酸性和揮發(fā)性,配制溶液時(shí)注意在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。
2. 高氯酸遇光會(huì)分解,在配制標(biāo)曲及實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)樣小瓶需使用棕色的。
4 總結(jié)
本篇介紹的分析方法,參考的是標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測(cè)定,采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測(cè)器測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試峰型良好,目標(biāo)峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好,R值在0.999以上,保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.116%,峰面積重復(fù)性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測(cè)試結(jié)果良好,濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,三倍信噪比作為檢出限計(jì)算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)方法中對(duì)儀器的要求。
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