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皖儀科技液相色譜對氯霉素的檢測方法

前言

氯霉素是一種廣譜抗生素，最初由委內瑞拉鏈霉菌產生。它在1947年被首次分離成功，并在次年開始通過化學方法合成。氯霉素對多種需氧革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌、厭氧的擬桿菌、立克次氏體、衣原體及菌質體都有抑制作用，尤其對沙門氏菌屬、流感桿菌和擬桿菌屬等有良好的抗菌能力。由于它的特性，在感染性疾病的治療中發揮著重要的作用。然而，氯霉素的使用也伴隨著一些副作用。氯霉素在人體內蓄積的藥物濃度達到一定量時會產生多種急慢性中毒，并導致再生障礙性貧血癥和溶血性貧血等疾病，導致身體不能制造紅血球、白血球和血小板，同時還會引起視神經炎、視力障礙、多發性神經炎、神經性耳聾以及嚴重失眠。還可引發中毒性精神病，主要表現為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。因氯霉素的毒副作用較大，聯合國糧農組織、歐盟、美國均明確規定在食用動物中禁止使用氯霉素。2019年，在我國，氯霉素也被列入食品動物中禁止使用的藥品。因此，對氯霉素的檢測很有必要。

本篇介紹的分析方法，參考的是標準SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測定，采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測器測試。實驗結果顯示，系統適應性測試峰型良好，目標峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好，R值在0.999以上，保留時間重復性RSD為0.116%，峰面積重復性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測試結果良好，濃度為0.05mg/L的氯霉素標準品，三倍信噪比作為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項數據結果滿足標準方法中對儀器的要求。

1 方法原理

高效液相色譜-紫外檢測器測定，外標法定量。

2  儀器配置及實驗方法

2.1 儀器配置

表1 皖儀液相配置清單表

2.2 實驗方法

2.2.1 試劑和標準品制備

表2 試劑及標準品清單

2.2.1.1 標準儲備液：稱取10mg左右（精確到0.1mg）氯霉素標準品于10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，配成1000mg/L左右的標準儲備液，-18℃冰箱保存。

2.2.1.2 標準使用液: 分別吸取氯霉素標準儲備液適量，用甲醇稀釋為100mg/L的氯霉素標準使用液。需現配現用。

2.2.1.3 標準工作曲線：將氯霉素標準使用液用0.5mol/L高氯酸溶液稀釋濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L 系列濃度工作曲線。

2.2.2 色譜條件

表3 色譜條件

3 實驗結果

3.1 系統適用性

圖1 濃度為5mg/L氯霉素譜圖

說明：由圖可知，氯霉素峰型良好，目標峰周圍無雜峰，滿足實驗要求。

3.2 線性關系

圖2 氯霉素標曲

說明：本次測試的氯霉素標準工作曲線濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L。由上圖可知，氯霉素線性方程為y=131.23850x+3.16337。R值為0.99978，線性良好，滿足實驗要求。

3.3  重復性

圖3 濃度為0.5mg/L的氯霉素6針重復性譜圖

表4 氯霉素6針重復性數據

說明：根據上表數據可知，氯霉素保留時間RSD為0.116%，峰面積RSD為0.378%。重復性均小于0.4%,滿足實驗要求。

3.4 檢出限

圖4 濃度為0.05mg/L的氯霉素標準品譜圖

說明：根據上圖數據所示，濃度為0.05mg/L的氯霉素標準品，三倍信噪比為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。滿足實驗要求。

3.5 注意事項

1. 高氯酸具有強酸性和揮發性，配制溶液時注意在通風櫥中進行。

2. 高氯酸遇光會分解，在配制標曲及實驗時進樣小瓶需使用棕色的。

4 總結

本篇介紹的分析方法，參考的是標準SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測定，采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測器測試。實驗結果顯示，系統適應性測試峰型良好，目標峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好，R值在0.999以上，保留時間重復性RSD為0.116%，峰面積重復性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測試結果良好，濃度為0.05mg/L的氯霉素標準品，三倍信噪比作為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項數據結果滿足標準方法中對儀器的要求。